【佳學(xué)基因檢測(cè)】基因檢測(cè)技術(shù)大全：雙脫氧DNA測(cè)序技術(shù)

基因測(cè)序技術(shù)是當(dāng)今賊熱門的分子診斷技術(shù)之一，它通過(guò)獲取盡可能多的核酸序列，并對(duì)其所能帶來(lái)的價(jià)值進(jìn)行分析，基因測(cè)序技術(shù)一定發(fā)展到第四代。

第一代測(cè)序技術(shù)是傳統(tǒng)的DNA一代測(cè)序技術(shù)以Sanger雙脫氧末端終止法為代表。該方法通過(guò)凝膠電泳區(qū)分長(zhǎng)度不同的DNA片段，從而判斷堿基排列情況。一代測(cè)序技術(shù)在遺傳病致病基因的克隆、遺傳病的基因診斷、人類基因組計(jì)劃的實(shí)施等方面起到了重要作用，目前仍是判定測(cè)序結(jié)果正確性的金標(biāo)準(zhǔn)。由于存在較長(zhǎng)時(shí)間的電泳環(huán)節(jié)，測(cè)序效率低，數(shù)據(jù)產(chǎn)率低。以此為基礎(chǔ)的測(cè)序儀器被個(gè)別公司壟斷。

以Sanger為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的第一代測(cè)序儀器的核心技術(shù)有三個(gè)：一是酶法合成DNA，二是標(biāo)記末端核苷酸的終止；三是用凝膠電泳的方法將新合成的核苷酸鏈按合成終止時(shí)的長(zhǎng)度分開(kāi)；四、是實(shí)現(xiàn)分離后檢測(cè)DNA片段。基于毛細(xì)管電泳的全自動(dòng)桑格法測(cè)序儀由于讀取長(zhǎng)度、通量、正確度等優(yōu)點(diǎn)，目前仍有一定的市場(chǎng)，多用于序列驗(yàn)證(不同方法)、法醫(yī)鑒定(更正確)等。這種儀器市場(chǎng)的長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展，要看二代測(cè)序儀的技術(shù)優(yōu)勢(shì)能否全面顛覆，以及儀器制造商是否盈利。

這一代測(cè)序原理很簡(jiǎn)單清楚，通過(guò)鏈?zhǔn)浇K止法來(lái)讀取序列信息(想知道怎么測(cè)的自己百度sanger測(cè)序)。我估計(jì)這個(gè)東西的成本不高，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室送公司的外包測(cè)序一次反應(yīng)10塊錢測(cè)800bp，一次刨除人力成本我不知道還剩幾塊錢。并且這款很好，市場(chǎng)上各種阿貓阿狗公司都會(huì)來(lái)推銷他們的排序服務(wù)。

這種分析技術(shù)是分子生物學(xué)的重要基礎(chǔ)技術(shù)。ABI公司的序列儀為例，用4種熒光染料對(duì)端子和引物進(jìn)行標(biāo)記，并用Sanger測(cè)序反應(yīng)得到不同的熒光標(biāo)記。每個(gè)樣本的4個(gè)測(cè)序反應(yīng)產(chǎn)物都可以在同一泳道內(nèi)電泳，從而減少不同測(cè)序泳道間遷移率的差異對(duì)正確度的影響。同時(shí)，采用同步掃描技術(shù)對(duì)各熒光標(biāo)記片段進(jìn)行電泳分離，激發(fā)熒光經(jīng)光柵分光，識(shí)別不同堿基信息的不同顏色熒光，并在CCD照相機(jī)上同步成像。計(jì)算機(jī)可以在電泳過(guò)程中同步檢測(cè)儀器的運(yùn)行狀態(tài)，并能以電泳、熒光吸收峰圖、堿基的排列次序等方式輸出。這是一種測(cè)序技術(shù)的基本原理。

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