【佳學(xué)基因檢測】基因檢測測序技術(shù)金標(biāo)準(zhǔn):Sanger法一代測序
基因測序技術(shù)始于1977年,sanger發(fā)明的DNA雙脫氧末端終止測序法拉開了序幕。Sanger在1958年和1980年因?yàn)橐葝u素測序和DNA測序而兩度獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng),是第四位兩度獲得諾貝爾獎(jiǎng)以及唯一獲得兩次諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的人。
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Sanger測序
Sanger測序采用四個(gè)雙脫氧核糖核酸(ddNTP)加入到正在合成的鏈上,由于雙脫氧核糖核酸少了一個(gè)氧原子,一旦被加入到DNA鏈上,反應(yīng)即終止。
通過構(gòu)建四個(gè)反應(yīng)體系,加入AGCT四種雙脫氧核糖核酸,同時(shí)調(diào)節(jié)脫氧核糖核酸(dNTP)和ddNTP的相對濃度,可以使反應(yīng)擴(kuò)增得到幾百至上千堿基的終止產(chǎn)物。
隨后通過凝膠電泳對產(chǎn)物進(jìn)行分離,分為四個(gè)泳道,每個(gè)泳道對應(yīng)一種堿基,然后讀取條帶顯影結(jié)果。
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該方法因正確率高,被稱為基因檢測的金標(biāo)準(zhǔn),但是耗時(shí)長,成本高。
2001年人類基因組計(jì)劃就是采用sanger測序完成的,從1990年人類基因組計(jì)劃建立開始,全球的科學(xué)家歷時(shí)11年耗資30億美元完成。
進(jìn)入21世紀(jì)后,隨著物理及化學(xué)技術(shù)的發(fā)展,開始采用相同激發(fā)波長但不同發(fā)射波長的熒光集團(tuán)來標(biāo)記ddNTP,ATGC對應(yīng)不同的熒光基團(tuán)產(chǎn)生不同顏色的光被計(jì)算機(jī)讀取,測序的速度和效率大大提高。
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