【佳學基因檢測】小腦共濟失調基因檢測
小腦共濟失調基因檢測導讀:
小腦性共濟失調(小腦共濟失調(CA))是一組神經(jīng)系統(tǒng)疾病,其特點是肢體和眼球運動協(xié)調受損以及言語困難。小腦共濟失調(CA)的主要病理特征是進行性小腦萎縮。然而,在大多數(shù)情況下,其表型復雜,涉及多種神經(jīng)系統(tǒng)缺陷。由于表型和遺傳異質性顯著,小腦共濟失調(CA)的診斷仍然具有挑戰(zhàn)性。在病因學上,小腦共濟失調(CA)分為獲得性、散發(fā)性和遺傳性共濟失調。遺傳性共濟失調進一步分為常染色體顯性小腦性共濟失調(AD小腦共濟失調(CA),也稱為脊髓小腦性共濟失調,SCAs)、常染色體隱性小腦性共濟失調(ARCA)和X連鎖共濟失調。根據(jù)類似的臨床特征,還區(qū)分發(fā)作性共濟失調(EA)和痙攣性共濟失調(SPAX)。散發(fā)性共濟失調,以前稱為特發(fā)性共濟失調,是一種病因不明的小腦進行性疾病,既非獲得性也非單基因遺傳。
小腦共濟失調基因檢測可以幫助我們了解哪些?
小腦性共濟失調(小腦共濟失調(CA))是一組神經(jīng)系統(tǒng)疾病,其主要特征是肢體和眼球運動協(xié)調受損以及言語障礙。小腦共濟失調(CA)的核心病理機制是進行性小腦萎縮;然而,在大多數(shù)情況下,其表型復雜,涉及多種神經(jīng)系統(tǒng)缺陷。由于其表型和遺傳異質性顯著,小腦共濟失調(CA)的確診仍然具有挑戰(zhàn)性。在病因學方面,我們將小腦共濟失調(CA)分為獲得性、散發(fā)性和遺傳性共濟失調。遺傳性共濟失調可以進一步分為常染色體顯性小腦性共濟失調(AD小腦共濟失調(CA),也稱為脊髓小腦性共濟失調,SCAs)、常染色體隱性小腦性共濟失調(ARCA)和X連鎖共濟失調?;谙嗨频呐R床特征,我們還區(qū)分發(fā)作性共濟失調(EA)和痙攣性共濟失調(SPAX)。散發(fā)性共濟失調,以前被稱為特發(fā)性,是一種病因不明的小腦進行性疾病,既非獲得性的也非單基因的。
串聯(lián)重復擴增引起的小腦共濟失調
1991年,基因解碼的先期使用者在脆性X綜合征和脊髓延髓肌萎縮癥中發(fā)現(xiàn)了三核苷酸重復擴增,從而開啟了串聯(lián)重復疾?。═RD)的識別時代。人類大多數(shù)TRD是由短串聯(lián)重復序列(STR,也稱為微衛(wèi)星DNA)的擴增引起的,這些STR由1-6 bp的重復DNA單位組成。由三核苷酸小腦共濟失調CAG重復擴增引起的多聚谷氨酰胺疾病占據(jù)了TRD的大部分。在顯性遺傳的小腦共濟失調(CA)中,小腦共濟失調CAG重復擴增于1993年由神經(jīng)系統(tǒng)疾病的致病基因鑒定基因解碼在SCA1中被描述,隨后在齒狀核紅核蒼白球路易體萎縮(DRPLA)、SCA3、SCA2、SCA6、SCA7、SCA12和SCA17中也被發(fā)現(xiàn)。在隱性共濟失調中,1996年在Friedreich共濟失調(FRDA)中發(fā)現(xiàn)了一種GAA內含子重復突變。迄今為止,由基因解碼發(fā)現(xiàn)的重復擴增共濟失調至少有16種,它們被收錄了基因檢測數(shù)據(jù)庫中,加速了基因檢測結果的判讀。這些致病性擴增位于編碼或非編碼DNA序列中,包含3至6 bp的重復基序?;蚪獯a基因檢測的進一步研究進展顯示,2019年在小腦性共濟失調、神經(jīng)病變和前庭無反射綜合征(CANVAS)中發(fā)現(xiàn)了RFC1基因中的雙等位基因內含子AAGGG重復擴增。
表1:串聯(lián)重復擴增性共濟失調
串聯(lián)重復擴增性共濟失調 |
基因 | 重復基序 | 地區(qū) | 臨床特征* |
常染色體顯性 | ||||
SCA1 | ATXN1 | CAG | 編碼 | 痙攣、周圍神經(jīng)病變、認知能力下降 |
SCA2 | ATXN2 | CAG | 編碼 | 緩慢掃視眼球運動、周圍神經(jīng)病變、認知能力下降、多巴胺反應性帕金森病、肌張力障礙、舞蹈病 |
SCA3 | ATXN3 | CAG | 編碼 | 面部-舌側肌束震顫、錐體束征、帕金森病、周圍神經(jīng)病變、遠端肌肉萎縮、眼球突出、自主神經(jīng)癥狀 |
SCA6 | CACNA1A | CAG | 編碼 | 晚發(fā)病,進展緩慢,復視,前庭眼反射異常 |
SCA7 | ATXN7 | CAG | 編碼 | 視錐細胞-視桿細胞視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良,視力喪失,發(fā)病年齡和進展速度差異很大 |
SCA8 | ATXN8OS and ATXN8 | CTG and CAG | 非編碼(CTG)、編碼(CAG) | 掃描性構音障礙,特征性言語緩慢,軀干蹣跚,進展緩慢 |
SCA10 | ATXN10 | ATTCT | 非編碼 | 反復發(fā)作,進展緩慢 |
SCA12 | PPP2R2B | CAG | 非編碼 | 上肢動作性震顫、頭部震顫、細微帕金森癥、認知和精神表現(xiàn) |
SCA17 | TBP | CAG and CAA | 編碼 | 癡呆、精神癥狀、舞蹈癥、肌張力障礙 |
SCA31 | BEAN1 | TAAAA, TAGAA, and TGGAA | 非編碼 | 成人晚期發(fā)病,進展緩慢,感覺正常 |
SCA36 | NOP56 | GGCCTG | 非編碼 | 神經(jīng)性聽力損失、舌肌顫動和萎縮、上、下運動神經(jīng)元受累 |
SCA37 | DAB1 | ATTTC | 非編碼 | 疾病早期出現(xiàn)構音障礙和異常垂直眼球運動 |
DRPLA | ATN1 | CAG | 編碼 | 舞蹈手足徐動癥、癡呆、癲癇、肌陣攣、精神癥狀 |
常染色體隱性 | ||||
Friedreich ataxia | FXN | GAA | 非編碼 | 感覺軸索性神經(jīng)病、下肢腱反射消失、脊柱側凸、肥厚性心肌病、高弓足、糖尿病 |
CANVAS | RFC1 | AAGGG and AAAGG | 非編碼 | 感覺神經(jīng)病或神經(jīng)元病、雙側前庭反射消失、慢性咳嗽、自主神經(jīng)功能紊亂 |
X連鎖 | ||||
FXTAS | FMR1 | CGG | 非編碼 | 晚發(fā)性成人,意向性震顫,認知能力下降 |
SCA脊髓小腦性共濟失調、DRPLA齒狀核紅核蒼白球路易體萎縮、CANVAS小腦性共濟失調、神經(jīng)病變、前庭反射消失綜合征;FXTAS脆性 X 相關震顫/共濟失調綜合征;*均患有小腦性共濟失調
TRD的流行病學研究顯示,它們是全球小腦性共濟失調(CA))的常見原因。Friedreich共濟失調(FRDA)是歐洲最常見的遺傳性共濟失調,患病率為每100,000人中2-4人。脆性X綜合征相關震顫/共濟失調綜合征(FXTAS)是由FMR1基因中的三核苷酸CGG擴增引起的,占成年發(fā)病且無家族史男性小腦共濟失調(CA)患者的2%-4%。在初期基因解碼基因檢測中,發(fā)現(xiàn)22%的晚發(fā)型共濟失調病例帶有純合的RFC1五核苷酸擴增,這不僅可表現(xiàn)為CANVAS,還可導致有限的周圍、前庭或小腦功能障礙。促腎上腺皮質激素受體(SCAs)的總體患病率估計為1-3:100,000。全球最常見的SCAs是SCA3,其次是SCA1、SCA2、SCA6和SCA7。多聚谷氨酰胺促腎上腺皮質激素受體(SCAs)可能占AD小腦共濟失調(CA)約一半,但不同地理區(qū)域的發(fā)病率差異顯著。陽性家族史在研究中檢出擴增的百分比顯著影響。盡管對小腦共濟失調(CA)患者常規(guī)進行最常見的SCAs重復擴增篩查,但在有或無豐富家族史的個體中,檢出率范圍廣泛,從0%至18.9%不等。然而,在某些非家族性病例中,特別應考慮檢測特定SCAs的重復擴增,例如早發(fā)性共濟失調和視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良中的SCA7,晚發(fā)性共濟失調中的SCA6,以及緩慢進展性共濟失調中的SCA8。
常規(guī)變異引起的小腦共濟失調
自20世紀90年代以來,佳學基因解碼基因檢測觀察到越來越多由各種基因序列和拷貝數(shù)變異(CNV)引起的新型小腦性共濟失調(CA)。最常見的遺傳性小腦共濟失調(ARCA)表型包括伴有眼球運動不能癥的共濟失調(AOA)和毛細血管擴張性共濟失調(AT),這些表型在20世紀70年代和80年代有所區(qū)分。1995年,致病基因定位克隆技術確認了AT的致病基因。同年,基因解碼基因檢測報道了維生素E缺乏癥伴有共濟失調(AVED)是由TTPA基因中的雙等位基因變異引起的。APTX和SETX基因的變異分別在2001年和2004年被發(fā)現(xiàn)與AOA相關。然而,直到新一代測序(NGS)技術的應用,基因解碼基因檢測才能夠識別出許多新型遺傳性小腦共濟失調,其中大多數(shù)非常罕見。NGS技術在臨床實踐中的應用表明,該方法在診斷多樣性神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面極為有效。從21世紀第二個十年開始,許多研究開始利用NGS技術對表現(xiàn)為各種共濟失調相關表型的患者進行分子診斷和亞型致病基因鑒定診斷。主要采用了三種方法:靶向測序面板(分析有限數(shù)量的基因編碼外顯子和側翼內含子)、全外顯子組測序(WES)和最近的全基因組測序(WGS)。在NGS技術推廣之前,患者通常需要接受大量標準化診斷測試。一般而言,常見的重復擴增型小腦共濟失調必須通過靶向技術排除,因為NGS技術無法可靠地檢測到這些變異。在一項探索性基因解碼分析,致病基因鑒定基因解碼分析了50名先證患者的118個已知和候選共濟失調基因,總體檢出率為18%,在青少年早發(fā)病且有陽性家族史的患者亞組中,檢出率高達75%。WES技術在兒童共濟失調患者中的應用顯示成功率為46%。后續(xù)研究證實,在早發(fā)型小腦共濟失調、近親家庭和有陽性家族史的患者中,可以達到比較來說更高比例的診斷率。然而,這類病例僅占小腦性共濟失調的少數(shù)?;谌驕y序和基因解碼技術的基因檢測可以將診斷率提高一倍。
下一代測序在兒童期小腦共濟失調中的應用
關于下一代測序在兒童期小腦共濟失調中的應用,研究表明NGS在小腦共濟失調(CA)兒童和青少年群體中的實用性。盡管兒童期共濟失調的總體患病率相對較高,估計為每100,000名兒童中有26例,但其中相當一部分可歸因于獲得性和混合病因,例如共濟失調性腦癱(CP)。關于所謂的CP病例是否由非進行性腦損傷引起,是佳學基因解碼進一步專注的領域。
兒童遺傳性共濟失調具有廣泛的表型和遺傳異質性,通常是復雜表型的一部分,伴隨多種并發(fā)癥。共濟失調可能表現(xiàn)為先天性后腦異常(如Joubert綜合征、Dandy Walker畸形和小腦橋腦發(fā)育不全)、復雜的神經(jīng)發(fā)育障礙(如MECP2障礙),或是各種代謝和線粒體疾病的征兆。特定的非共濟失調癥狀以及影像學和實驗室檢查的異常通??梢灾笇г\斷,并實施有針對性的基因檢測。
在兒童共濟失調隊列中,NGS的診斷率(DR)從25%到80%以上不等,具體取決于研究組的選擇和NGS方法的類型(如面板測序與全外顯子組測序)。致病基因鑒定基因解碼分析了WES在兒童期發(fā)病的小腦共濟失調(CA)中的效用,在28個家族中的13個家族獲得了分子診斷(DR = 46%)。其他采用基因解碼技術的檢測分析機構報道了類似的結果,他們對小腦萎縮兒童進行了評估,并報告了39%的成功率(28個家族中的9個)。在84名兒科患者中應用靶向共濟失調基因面板,25%的患者獲得了基因診斷。在近親家庭中,全外顯子組測序可以為高達80%的病例提供分子診斷,鑒定出發(fā)病的原因,以幫助阻斷遺傳。在一些系列研究中,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)數(shù)個基因重復與伴有認知障礙的先天性或嬰兒期發(fā)病的小腦共濟失調(CA)有關。這些基因主要涉及離子通道編碼基因,如小腦共濟失調CACNA1A、小腦共濟失調CACNA1G、KCNC3和ITPR1,以及β-III血影蛋白基因SPTBN2,后者參與膜蛋白的運輸和穩(wěn)定。所有這些基因與各種退行性和發(fā)育性神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關,包括非進行性或緩慢進行性小腦共濟失調,其發(fā)病可從嬰兒期延續(xù)至成年期。
關于NGS在早發(fā)性小腦性共濟失調(EOCA)中的應用,更多信息來自對成人的大型系列研究,這些患者的癥狀在40歲之前開始出現(xiàn)。總體而言,這些研究顯示NGS的診斷率從21%到50%以上不等,具有與孟德爾遺傳相符的陽性家族史的患者分子診斷百分比更高。NGS研究結果總結了不同人群中EO小腦共濟失調(CA)的最常見病因。根據(jù)基因解碼基因檢測的大數(shù)據(jù)分析,西方國家最常見的隱性共濟失調包括FRDA、痙攣性截癱7型(SPG7)、夏洛瓦-薩格奈常染色體隱性痙攣性共濟失調(ARSACS)、AOA2、SYNE1相關共濟失調、AT、AOA1和POLG相關共濟失調。此外,無論種族如何,Marinesco-Sjögren綜合征和AVED的發(fā)病率相對較高,后者在北非和地中海地區(qū)尤為常見??傮w而言,這些疾病構成了已知的100多種AR小腦共濟失調(CA)病因中的大多數(shù)。雖然大多數(shù)病例發(fā)生在兒童和青少年時期,但成年期發(fā)病的情況也時有報道,特別是SPG7和SYNE1共濟失調,它們通常表現(xiàn)為成人期發(fā)病。2019年,國際帕金森和運動障礙協(xié)會遺傳性運動障礙分類和命名工作組提出了一種修訂的AR小腦共濟失調(CA)命名系統(tǒng),該系統(tǒng)基于表型前綴和基因名稱??傮w而言,62種以小腦共濟失調(CA)為突出特征的疾病在命名時采用ATX做為前綴,而30種以小腦共濟失調(CA)和共存的其他主要運動障礙為特征的疾病在命名時采用雙前綴命名法。同年,小腦和共濟失調研究協(xié)會工作組的共識聲明提出了59種原發(fā)性AR小腦共濟失調(CA)的列表。這兩個分類都列出了許多其他可能以共濟失調為附加特征的疾病。成為更新的《人體基因序列變化與疾病表征》中的規(guī)范命名法。
下一代測序在成人小腦共濟失調中的應用
在下一代測序(NGS)時代之前,SCA的基因診斷主要依賴于排除常見的小腦共濟失調CAG三核苷酸擴增,這種方法可以診斷出大約一半的自發(fā)性遺傳性小腦性共濟失調(AD小腦共濟失調(CA))。隨著分子技術的進步,已經(jīng)鑒定出多種新型SCA亞型和36種致病基因。基因解碼基因檢測通過結合面板測序和TaqMan聚合酶鏈反應檢測,研究了412例顯性遺傳小腦共濟失調(CA)的先證者病例,這些病例的多聚谷氨酰胺SCA檢測結果為陰性,并報告了高發(fā)病率的通道病。發(fā)現(xiàn)小腦共濟失調CACNA1A基因的致病變異在這類患者中是最常見的SCA遺傳原因,其次是其他離子通道編碼基因,如KCND3、KCNC3和KCNA1。然而,盡管有陽性的一級家族史,仍有15%的病例檢測到相關的遺傳變異。同樣,另一位基因解碼分析顯示,在中國描述的最大樣本中,小腦共濟失調CAG重復擴增陰性的顯性小腦共濟失調(CA)的診斷率較低(9.8%)。在這項研究中,超過80%的480例無陰性家族史病例未能獲得基因診斷。這些結果表明,盡管有強烈的跡象表明遺傳因素在發(fā)病中起作用,但仍有相當一部分小腦共濟失調(CA)無法通過數(shù)據(jù)庫比對找到發(fā)病原因,致病基因鑒定基因解碼增加了找出的比例,但在中國個人付費的低價格習慣使得患者錯失采用基因解碼基因檢測得到明確診斷的機會。因為從個體意愿上講,個人付費的受檢者在缺乏相關知識的情況下,極易選擇單一的突變類型或更簡單更便宜的分析方法。值得注意的是,盡管通道病在加拿大和大部分歐洲地區(qū)的小腦性共濟失調中比較常見,但在中國和日本地區(qū)卻非常罕見,這可能解釋中國數(shù)據(jù)中更多獲得陰性結果的群體遺傳學原因。
大多數(shù)到共濟失調門診就診的成人患者癥狀發(fā)作較晚,并且沒有家族史。排除獲得性和遺傳性原因后,這些患者被歸類為散發(fā)性成人發(fā)病共濟失調(SAOA)。根據(jù)《神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)病原因及基因檢測指南》,NGS方法可以在明顯SAOA患者中檢測到6%至33%的常規(guī)變異。共濟失調的基因解碼基因檢測對194例進行性SAOA患者進行了大規(guī)模篩查,查找201個共濟失調相關基因的致病變異,其中6%獲得了基因診斷。在致病基因鑒定基因解碼的深入分析中,對于40歲后發(fā)病的患者,外顯子組靶向捕獲測序的診斷率為6.4%。Klockgether和Giordano等人估計,首先進行常見串聯(lián)重復擴增檢測,然后進行共濟失調特異性NGS組合檢測,可對約20%的明顯SAOA患者進行基因診斷。除了檢測極其罕見的單基因病因外,NGS基礎上的基因解碼基因檢測還總結了幾種與成人發(fā)病的小腦共濟失調(CA)有關的常見基因,例如SYNE1、SPG7和ANO10。重要的是,大量被歸類為小腦共濟失調(CA)的患者攜帶傳統(tǒng)上與遺傳性痙攣性截癱(HSP)相關的致病變異。這表明共濟失調和HSP在途徑和機制上可能存在相似之處,并產(chǎn)生了連續(xù)共濟失調-痙攣疾病譜的概念。
表 2:基因反復出現(xiàn)在幾組共濟失調患者中,并通過下一代測序檢測到致病變異
基因 | 遺傳命名法* | 小腦共濟失調相關表型 (OMIM) | 遺傳方式 | 典型臨床特征** | 發(fā)病年齡 |
CACNA1A | - | 發(fā)作性共濟失調 2 型 | 常染色體顯性 | 功能喪失突變的表型異質性高,包括:發(fā)作性和/或進行性小腦共濟失調、認知障礙、偏癱性偏頭痛、癲癇性腦病、自閉癥、陣發(fā)性非癲癇事件 | 從嬰兒到成年 |
伴有進行性小腦共濟失調的家族性偏癱性偏頭痛 1 型 | |||||
脊髓小腦性共濟失調 6 型 | |||||
ITPR1 | - | 脊髓小腦性共濟失調 15 | 常染色體顯性 | 進展緩慢,蹣跚行走,上肢姿勢性震顫 | 平均 35 歲(范圍 18-66 歲) |
脊髓小腦共濟失調 29,先天性非進行性 | 進展緩慢或無進展,認知缺陷 | 出生時發(fā)病 | |||
ATX-ITPR1 | 吉萊斯皮綜合征 | 常染色體顯性和常染色體隱性 | 部分無虹膜、肌張力低下、智力障礙 | 出生時發(fā)病 | |
SPTBN2 | - | 脊髓小腦性共濟失調 5 | 常染色體顯性 | 進展緩慢,意向性震顫,輕度面部肌顫搐;雜合突變也可導致先天性非進行性共濟失調,伴有精神運動發(fā)育遲緩 | 可變(從出生到50歲) |
ATX-SPTBN2 | 脊髓小腦性共濟失調,常染色體隱性遺傳 14 | 常染色體隱性 | 進展緩慢、全面發(fā)育遲緩、認知障礙 | 嬰兒期發(fā)病 | |
SPG7 | HSP/ATX-SPG7 | 痙攣性截癱 7 | 常染色體隱性遺傳(也有報道為常染色體顯性遺傳) | 痙攣性截癱、振動覺受損、視神經(jīng)萎縮、眼肌麻痹 | 平均 30 歲(范圍 11-72 歲) |
ANO10 | ATX-ANO10 | 脊髓小腦性共濟失調,常染色體隱性遺傳 10(常染色體隱性遺傳小腦性共濟失調 3 型) | 常染色體隱性 | 進展緩慢、錐體束征、運動遲緩、高弓足、運動神經(jīng)元受累、癲癇、認知能力下降 | 通常發(fā)生在成年期(從青少年到 27 至 53 歲之間) |
SYNE1 | ATX-SYNE1 | 脊髓小腦性共濟失調,常染色體隱性遺傳 8;(常染色體隱性小腦性共濟失調 1 型) | 常染色體隱性 | 純小腦綜合征,上、下運動神經(jīng)元特征,小腦認知和情感綜合征,可能為早發(fā)性多系統(tǒng)疾病,伴有呼吸功能障礙和智力障礙 | 通常發(fā)生在成年期(6-45 歲) |
SACS | ATX/HSP-SACS | 痙攣性共濟失調,Charlevoix-Saguenay 型 | 常染色體隱性 | 周圍感覺運動神經(jīng)病、下肢痙攣、髓鞘增生性視網(wǎng)膜纖維 | 通常發(fā)生在嬰兒期或幼兒期(范圍:0-40 歲) |
SETX | TX-SETX | 脊髓小腦性共濟失調,常染色體隱性遺傳,伴有軸索性神經(jīng)病 2 型(伴有眼球運動不能癥的共濟失調 2 型) | 常染色體隱性 | 軸突感覺運動神經(jīng)病、眼球運動不能癥(約一半患者)、血清甲胎蛋白濃度升高 | 平均 14 年(范圍 3-30 年) |
小腦性共濟失調的未來基因檢測
盡管在異質性神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷中,NGS已得到廣泛應用,但眾所周知,這些方法存在一些限制。多基因面板已被證明是一種有效的診斷工具,其相對較低的成本顯示出顯著的診斷效果。然而,它們分析的基因數(shù)量有限,這在復雜的共濟失調背景下可能引起重要問題。臨床表現(xiàn)可能與其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病重疊,如腦白質營養(yǎng)不良、代謝紊亂、痙攣性截癱和智力障礙,因此典型的共濟失調特異性基因組可能無法捕獲致病變異。在這方面,以全外顯子組測序(WES)為基礎的致病基因鑒定基因解碼具有分析幾乎所有(近95%)蛋白質編碼區(qū)序列的優(yōu)勢。最近,隨著NGS和生物信息學數(shù)據(jù)分析的不斷改進,WES在臨床環(huán)境中得到了廣泛應用。
就共濟失調而言,NGS的主要限制在于無法檢測到由串聯(lián)重復擴增和線粒體DNA數(shù)量變化引起的疾病。WES被認為不能有效檢測深內含子變異、拷貝數(shù)變異(CNV,定義為單個或更大的外顯子缺失和重復)、平衡易位或復雜倒位以及低水平插入。在外顯子組富含GC區(qū)域的良好覆蓋方面也可能存在問題。然而,最近已經(jīng)有許多問題得到了解決。而基因檢測機構提供多基因面板和外顯子組測序,同時進行mtDNA、CNV和選定深內含子變異的分析,具有高效的捕獲和令人滿意的讀取深度。盡管CNV在進行性共濟失調中只占少數(shù)變異,但它們的作用不容忽視。例如,致病基因鑒定基因解碼對260名共濟失調和/或痙攣性截癱患者進行了WES,進一步對代表性病例子集(n = 68)進行了CNV和重復擴增分析,發(fā)現(xiàn)了兩個致病性CNV和一個三核苷酸擴增。在另一個基因解碼檢測分析中,他們使用微外顯子組結合基于讀取深度的CNV檢查了一組33名患者,發(fā)現(xiàn)SETX基因中有兩個致病性CNV。雖然在常染色體隱性遺傳疾病中,通??梢酝ㄟ^第二等位基因中同時存在的SNV來輔助診斷,但未檢測到的CNV可能是導致假陰性結果的潛在原因,尤其是在具有新生顯性變異的病例中。多種NGS方法的組合,如外顯子組測序、靶向檢測、CNV和重復擴增分析,可以在各種異質性共濟失調隊列中提供超過50%的高診斷率,而這咱分析方法是高價位致病基因鑒定基因解碼的特點。事實證明,這個對于以找發(fā)病原因為目的的受檢者來說,更具有時效比,經(jīng)濟效益比。
對于原因不明的共濟失調患者,全基因組測序(WGS)可能是一個有前途的選擇。WGS旨在分析核DNA的所有編碼和非編碼序列,覆蓋了高達98%的整個人類基因組。相比之下,WES可以捕獲高達95%的外顯子組,而外顯子組僅占人類基因組的1%到2%。此外,WGS的覆蓋深度更加均勻,在檢測WES目標區(qū)域內的SNV、小插入和缺失(indel)以及CNV方面比WES更為有效。事實上,數(shù)據(jù)表明,迄今為止,WGS相對于WES在診斷上的優(yōu)勢主要在于更好地檢測基因組編碼區(qū)域的變化。盡管如此,也已報道了由非編碼DNA序列變異引起的共濟失調,例如與非編碼RNA RNU12相關的早發(fā)性小腦共濟失調。確定深內含子變異的致病性仍然是一個挑戰(zhàn),但隨著功能研究和生物信息學工具的進一步改進,這種情況在未來可能會發(fā)生改變。
到目前為止,基因檢測數(shù)據(jù)庫中只有少數(shù)研究評估了WGS在共濟失調中的效用。例如,Kang等人在對共濟失調患者進行了WGS后,發(fā)現(xiàn)三分之一的個體中存在致病變異,這些患者的重復擴增和多基因組合檢測結果為陰性。Kim等人研究了一組18例痙攣性截癱患者(伴或不伴共濟失調),報告診斷率為38.9%。然而,僅檢測到一個內含子變異,而WES可能會漏掉這種變異。需要對更大的患者群體進行進一步研究,以確定WGS在共濟失調中的潛在益處。
對于共濟失調來說,使用WES和WGS檢測串聯(lián)重復擴增的可能性特別高。傳統(tǒng)上,基于短讀測序的標準NGS技術無法檢測由最小擴增引起的TRD,SCA6除外。近年來,已開發(fā)了多種算法來分析短讀NGS數(shù)據(jù)中的STR,并成功應用于共濟失調患者?;仡櫺缘貞眠@些算法可以為NGS結果為陰性的個體提供診斷。此外,我們可以期待在未來發(fā)現(xiàn)新的導致共濟失調的擴增。最近,結合非參數(shù)連鎖分析的WGS已經(jīng)鑒定出了CANVAS和晚發(fā)性共濟失調中的致病性重復擴增。WGS還有助于發(fā)現(xiàn)幾種新的TRD,如良性成人家族性肌陣攣性癲癇、神經(jīng)元核內包涵體疾病和眼咽遠端肌病等。目前,SCA包括多種類型,如SCA4、SCA25、SCA30和SCA32,它們的遺傳原因仍有待確定。隨著PacBio和Nanopore等新的分子技術的引入,可以對正常和擴增的STR等位基因進行更多的測序,未來可能會在重復擴增障礙領域取得更多發(fā)現(xiàn)。
小腦共濟失調——采用單基因疾病檢測為什么存在嚴重不足
盡管先進的基因技術應用日益廣泛,但超過一半的小腦共濟失調(小腦共濟失調(CA))患者通過基于數(shù)所庫比對的基因檢測仍無法得到確診。對于癥狀晚發(fā)且沒有家族史的患者來說,確定疾病病因尤為重要,這類患者占了大多數(shù)小腦共濟失調(CA)的病例?!赌X病發(fā)生的原因及其基因檢測》中說的“特發(fā)性晚發(fā)性小腦共濟失調(CA)”曾廣泛用于沒有明顯獲得性或遺傳病因的個體。進一步的研究使我們能夠將小腦多系統(tǒng)萎縮(MSA-C)患者與這一類病例區(qū)分開來,MSA-C是一種以神經(jīng)膠質細胞質內含物為特征的獨立疾病實體。至于SAOA,其病因目前仍未明確。盡管SAOA患者表現(xiàn)出顯著的表型異質性,但他們也具有一些共同的特征,例如神經(jīng)影像學上的孤立性小腦萎縮、錐體束征、踝反射缺失、振動覺減弱和輕度泌尿系統(tǒng)癥狀。據(jù)基因解碼數(shù)據(jù),平均發(fā)病年齡為41歲至56歲,其病情進展明顯慢于MSA-C。
據(jù)基因解碼的經(jīng)驗,一些散發(fā)性小腦共濟失調(CA)患者可能是未確診的獲得性、自身免疫性或遺傳性病因的患者。隨著全基因組測序(WGS)的引入,基因解碼基因檢測有望識別出新的單基因病因,尤其是在早發(fā)性和家族性病例中。然而,相當一部分散發(fā)性共濟失調可能具有多因素或多基因背景。全基因組關聯(lián)研究(GWAS)通過比較患者與人群對照的變異頻率來識別基因組風險變異。迄今為止,尚未有關于散發(fā)性小腦共濟失調(CA)患者群體的GWAS發(fā)表。主要挑戰(zhàn)之一是GWAS需要大量的患者和對照,通常是數(shù)千個個體,在小腦共濟失調(CA)中難以實現(xiàn)。此外,另一個挑戰(zhàn)是區(qū)分表型同質的病例。至今,針對阿爾茨海默病(AD)、帕金森病、肌萎縮側索硬化癥和額顳葉癡呆等常見和復雜神經(jīng)退行性疾病的GWAS已鑒定出多種易感性變異,但其中大多數(shù)對風險的影響很小。在MSA中,GWAS尚未發(fā)現(xiàn)顯著的基因位點,但檢測到了幾種潛在的變異,需要在更大的樣本集中進行驗證?;蚪獯a的分析表明,AD具有顯著的多基因成分,可以用來計算罹患該疾病的遺傳風險。個體攜帶的風險等位基因總和稱為多基因風險評分(PRS),其中每個單核苷酸多態(tài)性(SNP)根據(jù)先前GWAS的效應大小進行加權,這種評分可能對多種常見疾病具有預測價值。已發(fā)表的關于AD和癲癇的GWAS有希望的結果指向PRS在未來的潛在臨床應用。通過國際聯(lián)盟收集大量臨床上同質的共濟失調患者,為進行GWAS和識別小腦共濟失調(CA)富含的潛在變異帶來了希望。
基因解碼基因檢測指出表觀遺傳學變化可能是某些原因不明的小腦共濟失調(CA)病例的原因;然而,關于這個論點的基因測試結果很少。DNA甲基化、組蛋白修飾和微小RNA(miRNA)等表觀遺傳機制在不改變基因組序列的情況下調節(jié)基因表達,并與各種神經(jīng)發(fā)育過程相關。對小腦共濟失調(CA)表觀遺傳學的研究表明,表觀遺傳失調與FRDA、FXTAS、共濟失調毛細血管擴張癥和幾種SCA的發(fā)病機制有關。已確認miRNA對浦肯野細胞的存活至關重要,其缺失可導致小腦退化和共濟失調的發(fā)展。在SCA1和SCA3中描述了特定miRNA水平的改變。由于miRNA在小腦共濟失調(CA)神經(jīng)病理學中的重要作用,有人推測miRNA結合位點或miRNA中的致病變異可能是一組原因不明的共濟失調的病因。在幾種三核苷酸擴增障礙中發(fā)現(xiàn)了異常的DNA甲基化譜,并且與發(fā)病年齡和體細胞重復不穩(wěn)定性的突變等位基因有關。全基因組DNA甲基化譜顯示共濟失調毛細血管擴張癥中存在甲基化位點的差異。需要進一步的研究來確定表觀遺傳失調在原因不明的小腦共濟失調(CA)發(fā)病機制中可能的角色。
小腦共濟失調基因檢測的共識性知識
過去 30 年是發(fā)現(xiàn) 小腦共濟失調(CA) 的單基因病因的時代。在通過靶向技術確定了三核苷酸擴增性共濟失調和幾種常規(guī)共濟失調之后,通過大規(guī)模平行測序檢測到的新型共濟失調致病變異數(shù)量迅速增加。NGS 引入臨床和實驗神經(jīng)病學顯著改變了我們對小腦共濟失調遺傳學復雜格局的理解。目前,多基因面板和 WES 在臨床實踐中的廣泛使用允許對大量患者快速診斷 小腦共濟失調(CA) 病因。然而,對于大多數(shù)受影響的個體,尤其是成年人,基于數(shù)據(jù)庫比對的基因檢測目前無法為診斷或治療提供參考。事實上,盡管有強烈的跡象表明遺傳因素存在,但相當一部分 小腦共濟失調(CA) 仍然無法基于數(shù)據(jù)庫比對的基因檢測結果找到發(fā)病原因。NGS 技術和生物信息學分析的進一步發(fā)展以及 WGS 的廣泛使用為未來更好地檢測常規(guī)變異和重復擴增帶來了希望。此外,為了確定導致小腦共濟失調的風險位點,需要對大量共濟失調患者進行 GWAS 研究。將 GWAS 結果與稀有變異負擔分析和全基因組測序的重復擴增數(shù)據(jù)相結合,可能會揭示無法解釋的 小腦共濟失調(CA) 的遺傳結構。
(責任編輯:佳學基因)