【佳學基因檢測】遺傳性癌癥植入前基因檢測面臨的實際挑戰(zhàn)

許多研究人員已經(jīng)對遺傳性癌癥病例使用PGT技術(shù)相關(guān)的實際問題進行了研究。直接和間接方法是分析單基因疾病的兩種廣泛使用的方法。直接方法是先進方法，包括對小的缺失、添加或重復進行片段分析，而小測序用于點突變。然而，間接方法使用了一組與待檢測基因相關(guān)的短串聯(lián)重復序列（STR）標記，但它需要家族中的兩個受影響個體來確定與疾病相關(guān)的單倍型。此外，這些方法的適用性因具體突變而異。

例如，重復或大缺失突變無法通過常規(guī)PCR進行鑒定，需要其他技術(shù)，如多重連接依賴性探針擴增（MLPA）或Southern印跡分析。盡管如此，這兩種方法都有局限性，例如需要大量的DNA，并且不適合分析單細胞樣本。當通過片段分析無法檢測到致病性變體時，必須通過對極體I與極體II進行分析或通過精子評估來鑒定單倍型。然而，使用多重PCR分析STR標記的標準間接方案需要在基因兩側(cè)至少有兩個信息豐富的STR才能正確檢測染色體重組事件，這會使方案更加復雜和耗時。因此，根據(jù)現(xiàn)有突變的性質(zhì)，通常對每對使用一種特殊的方案。

賊近的指南，如ESHRE的2020年P(guān)GT-M良好實踐建議，提供了PGT-M賊佳實踐的全面概述。這些指南強調(diào)了分析基因側(cè)翼區(qū)域兩側(cè)的重要性，以檢測重組，并將誤診風險降至賊低，因為僅依賴一側(cè)可能導致未檢測到的重組事件。此外，指南建議使用幾個PCR重復來識別任何ADO或擴增功效問題，因為兩者都可能因被分析的細胞而異。例如，在D11S1298標記中，ADO在PGT前研究中為20%，但在PGT周期中為0%，而在D11S1313基因型中，在PGT前研究中擴增效率約為70%，但在PGT周期中擴增效率為90%。

第二種方法是間接方法，當受影響的家庭成員不可用時，必須通過對極體I與極體II或精子進行分析來確定單倍型。在這些情況下，由于無法檢測特定的變體，可能不知道與所確定的單倍型相關(guān)的確切風險。然而，重要的是要注意，即使在無法正確確定風險的情況下，間接PGT的使用仍然可以提供有價值的信息，有助于指導臨床決策。例如，在識別出高風險單倍型的情況下，這些信息可用于告知患者繼續(xù)妊娠的潛在風險和益處。在某些情況下，盡管存在已知的風險，患者可能會選擇繼續(xù)妊娠，而在其他情況下，他們可能會選擇探索其他選擇，如捐贈卵子或收養(yǎng)。
 

在確定了低風險單倍型的情況下，這些信息可以為患者提供高效，并有助于緩解人們對遺傳疾病可能遺傳給后代的擔憂。

然而，在某些情況下，如Bautista Llacer等人提到的情況，間接方法不適用，因為聚合酶鏈式反應無法檢測致病性變體。間接方法是執(zhí)行該技術(shù)的標準PGT方法，因為相同的多重聚合酶鏈式反應包括可用于其他父母或家庭的相同微衛(wèi)星標記。

然而，當在所有情況下都需要至少兩個信息性STR時，很難創(chuàng)建多重PCR。此外，STR需要位于基因兩側(cè)的側(cè)翼區(qū)域，以檢測染色體中的重組事件。

因此，標準間接協(xié)議是特設(shè)協(xié)議。已經(jīng)為每一對制定了一個特殊的方案，它取決于現(xiàn)有致病性變體的性質(zhì)?？傮w而言，雖然使用間接PGT方法可能無法提供與特定遺傳變體相關(guān)的潛在風險的完整情況，它仍然可以提供有價值的信息，幫助指導決策，并告知患者他們的計劃生育選擇。臨床醫(yī)生必須仔細考慮每個病例的具體情況，并使用適當?shù)臋z測和分析方法，以確保提供的信息正確高效。

Bautista Llacer等人進行了熒光多重半巢式聚合酶鏈式反應，以鑒定攜帶致病性變體的單倍型，他們還表明，多重聚合酶鏈式反應的使用是檢測樣本污染、等位基因缺失或染色體重組的高效方法。

診斷不應僅基于基因側(cè)翼區(qū)域一側(cè)的STR標記，因為可能無法檢測到重組，并可能發(fā)生誤診。

Kakourou等人進一步研究并描述了一個STR標記與待研究基因之間的重組

PGT-M可用于已明確確定致病變體的單基因疾病。這些基因座是核基因座（X連鎖、常染色體顯性或隱性遺傳）或線粒體基因座（母系遺傳），涉及致病性種系遺傳變異。

阿齊姆等人指出，在體外受精過程中進行卵巢刺激以獲得更多的卵母細胞可能會增加雌二醇的濃度，這在理論上可能會增加BC反復的風險。因此，來曲唑已被用于抑制體外受精過程中的雌二醇，并已被證明是有效的。然而，值得注意的是，許多病例報告表明，接受試管嬰兒治療的患者和未接受試管嬰兒的患者的BC反復率相似。此外，對患者和健康對照進行的比較研究表明，在不使用來曲唑的情況下，試管嬰兒治療并沒有增加BRCA基因致病性變異引起的BC反復率。ESHRE指南還建議在某些情況下對胚胎進行癌癥易感性基因檢測，包括當一方或雙方伴侶是癌癥易感性基因攜帶者或有癌癥家族史時。

總體而言，將ESHRE指南納入PGT-M實踐可以幫助解決遺傳性癌癥病例在應用該技術(shù)時面臨的許多實際問題。這些指南推薦了可以導致正確診斷、降低誤診風險和提高技術(shù)療效的賊佳實踐。