【佳學(xué)基因-基因檢測(cè)】DNA是如何提取出來(lái)的?
DNA 的提取與純化往往是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的領(lǐng)先步。它是基因克隆、分子標(biāo)記、雜交檢測(cè)等多種實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。
由于細(xì)胞中含有核酸、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、脂類(lèi)、金屬陽(yáng)離子以及無(wú)機(jī)鹽等成分,而DNA主要存在于核酸中,為了得到高質(zhì)量和高純度的DNA,就需要把其他干擾因素有效去除,使DNA受污染程度降到賊低。血液、組織、口腔黏膜細(xì)胞等不同類(lèi)型的樣本,所采用的DNA提取方法也有所差異。DNA,提取,蛋白質(zhì),DNA,提取,蛋白質(zhì),DNA,提取,蛋白質(zhì),
首先是裂解細(xì)胞,蛋白質(zhì)變性,釋放核酸,常用試劑為SDS、EDTA,也可以利用NaOH進(jìn)行堿裂解;用蛋白酶K降解蛋白質(zhì),使DNA游離。然后利用酚/氯仿抽提DNA,其作用是去除未消化的蛋白質(zhì),用不同濃度的乙醇或異丙醇洗滌,去除其他離子。賊后利用TE緩沖液洗脫DNA,于-20℃存放。也可以利用吸附柱方法,特異性吸附DNA,高鹽低PH結(jié)合核酸,低鹽高PH洗脫DNA。
目前的分子實(shí)驗(yàn)室都會(huì)配有核酸提取儀,配合提取單個(gè)標(biāo)本的獨(dú)立分裝試劑,操作過(guò)程中,只需要加入標(biāo)本動(dòng)作,儀器自動(dòng)完成提取純化的全過(guò)程,不需要加入提取過(guò)程中所需要的試劑過(guò)程,用于臨床大批量樣本基因組DNA 的提取,提高了通量,同時(shí)也減少了人力時(shí)間成本。
為了驗(yàn)證DNA質(zhì)量,需要用分光光度計(jì)在260nm和280nm處測(cè)定DNA溶液的光吸收,A260與A280之比應(yīng)在1.70-1.90之間。DNA 質(zhì)量的好壞,甚至直接關(guān)系到后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成敗。
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