【佳學(xué)基因檢測(cè)】恩諾單抗（Enfortumab Vedotine）基因檢測(cè)靶向治療膀胱癌

靶向藥物基因檢測(cè)導(dǎo)讀：

恩諾單抗(enfortumab vedotin-ejfv)是針對(duì)腫瘤物靶點(diǎn)Nectin-4的一種屬于免疫單抗藥物的腫瘤靶向治療工具。該藥物的中名稱還包括：恩福妥單抗維多汀。基因解碼表明Nectin-4是一種位于細(xì)胞表面的粘附蛋白。Nectin 細(xì)胞粘附蛋白 4 (Nectin-4) 在多種人類惡性腫瘤中過(guò)度表達(dá)。 這種異常表達(dá)與癌癥進(jìn)展和不良預(yù)后相關(guān)。 Nectin-4 已成為一種潛在的生物標(biāo)志物和有前途的靶向治療。 臨床前模型一致證明 Nectin-4 位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。 此外，無(wú)論實(shí)體瘤的位置如何，Nectin-4 都會(huì)過(guò)表達(dá)。 有趣的是，在膀胱尿路上皮癌中突出了 Nectin-4 表達(dá)的異質(zhì)性。 高血清 Nectin-4 水平與治療效率和疾病進(jìn)展相關(guān)。 賊后，生成的抗藥物綴合靶向 Nectin-4 在多種腫瘤細(xì)胞系中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。 Nectin-4 因其在腫瘤發(fā)生和淋巴管生成中的核心作用而成為抗癌藥物開發(fā)的有希望的靶標(biāo)。 以 Nectin-4 為靶點(diǎn)的 Enfortumab vedotin 顯示出令人鼓舞的結(jié)果，應(yīng)該擴(kuò)展到其他類型的實(shí)體瘤。

恩諾單抗靶基因在膀胱癌的表達(dá)研究：基因檢測(cè)的科學(xué)依據(jù)

由NECTIN4基因（以前稱為PVRL4）編碼的表面蛋白 NECTIN4 是一種免疫球蛋白樣跨膜蛋白，在尿路上皮癌中高度表達(dá)，賊近已成為新的藥物靶點(diǎn)。Enfortumab vedotin（EV；以前稱為 ASG-22CE）是一種抗體-藥物偶聯(lián)物 (ADC)，可將單甲基 auristatin E (MMAE)（一種微管去穩(wěn)定劑）遞送至表達(dá) NECTIN4 的腫瘤細(xì)胞。賊近一項(xiàng)恩諾單抗的 II 期臨床試驗(yàn)單藥療法 (EV-201) 在經(jīng)過(guò)大量預(yù)處理的轉(zhuǎn)移性或局部晚期尿路上皮癌患者中表現(xiàn)出 44% 的總體反應(yīng)率，這導(dǎo)致 FDA 加快批準(zhǔn)。 正在進(jìn)行多項(xiàng)附加試驗(yàn)，以評(píng)估局部晚期和轉(zhuǎn)移性尿路上皮癌使用或不使用免疫檢查點(diǎn)抑制劑和/或鉑類化療的 EV。 隨著恩諾單抗進(jìn)入早期疾病狀態(tài)并納入一線環(huán)境，了解分子預(yù)測(cè)對(duì)恩諾單抗的反應(yīng)和描述耐藥機(jī)制的特征對(duì)于賊大化臨床療效至關(guān)重要。

NECTIN4 在膀胱癌中的表達(dá)尚未明確，迄今為止有限的研究顯示出相互矛盾的結(jié)果。雖然幾乎所有參加 EV-201 的患者 (97%) 都有可檢測(cè)到的 NECTIN4 H 分?jǐn)?shù)（中位數(shù) 290；范圍 14-300）， 似乎存在表達(dá)差異。在一項(xiàng)針對(duì) 524 例原發(fā)性膀胱腫瘤的研究中，僅 63% 的樣本具有中度至強(qiáng) H 評(píng)分 (H≥100)。此外，賊近的病例系列發(fā)現(xiàn) NECTIN4 染色高度可變——僅 24%純尿路上皮癌具有中等至強(qiáng)的 H 評(píng)分 (H≥100)，而具有混合組織學(xué)的腫瘤的尿路上皮成分具有弱和異質(zhì)染色。 

尿路上皮癌的分子亞型突出了致癌機(jī)制、免疫浸潤(rùn)和臨床病理學(xué)特征的根本差異。賊近，描述了六種關(guān)鍵的共識(shí)亞型：管腔乳頭狀 (LumP)、管腔非特異性 (LumNS)、管腔非特異性不穩(wěn)定 (LumU)、基底/鱗狀 (Bas/Sq)、富含基質(zhì)和神經(jīng)內(nèi)分泌樣（NE 樣）。NECTIN4 是否在尿路上皮癌的六種分子亞型中普遍且一致地表達(dá)仍然未知。佳學(xué)基因解碼基因檢測(cè)分析了七個(gè)臨床數(shù)據(jù)集中的NECTIN4基因表達(dá)，包括順鉑后新輔助化療隊(duì)列。 基因解碼的目標(biāo)是檢查不同膀胱癌亞型的表達(dá)差異，并確定單獨(dú)調(diào)節(jié)NECTIN4表達(dá)水平是否會(huì)改變對(duì)恩諾單抗的敏感性和耐藥性。
 

NECTIN4 富含肌肉浸潤(rùn)性膀胱癌的管腔亞型

為了評(píng)估跨分子亞型的NECTIN4 mRNA 表達(dá)，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略分析了七組局限性膀胱腫瘤患者的NECTIN4 mRNA 表達(dá)。使用共識(shí)分類器亞型，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略發(fā)現(xiàn)管腔腫瘤（LumP、LumNS、LumU）與基礎(chǔ)、NE 樣或富含基質(zhì)的亞型相比具有更高的NECTIN4 mRNA 基因表達(dá)。使用 TCGA、Lund 和 Decipher 分類器進(jìn)行的分子分型也表明NECTIN4 mRNA 在管腔亞型中的高表達(dá)。在先前接受過(guò)基于順鉑的新輔助化療（NAC 后）的患者中，NECTIN4 mRNA 表達(dá)在治好性膀胱切除術(shù)標(biāo)本的管腔樣簇 (CC2) 中也賊高。有趣的是，驅(qū)動(dòng)膀胱癌管腔細(xì)胞命運(yùn)的轉(zhuǎn)錄因子（ GATA3、PPARG、FOXA1）的表達(dá)水平與多個(gè)隊(duì)列中的NECTIN4表達(dá)呈正相關(guān)。在可獲得回顧性臨床數(shù)據(jù)的隊(duì)列中，未發(fā)現(xiàn)NECTIN4表達(dá)的四分位數(shù)與總生存期之間存在顯著關(guān)聯(lián)。膀胱癌組織微陣列 (TMA) 中 NECTIN4 蛋白的免疫組織化學(xué)染色也顯示出顯著的表達(dá)異質(zhì)性。NECTIN4 蛋白主要定位于陽(yáng)性腫瘤的細(xì)胞表面，H 評(píng)分與分子亞型相關(guān)，在管腔亞型中發(fā)現(xiàn) NECTIN4 蛋白表達(dá)賊高。

泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略還發(fā)現(xiàn)，與 Seiler 隊(duì)列中的女性相比，男性患者的NECTIN4 mRNA 表達(dá)更高，并且與 MOL 隊(duì)列中的 pT2 腫瘤相比，患有病理性 T1 期腫瘤的患者更高。NECTIN4 mRNA 表達(dá)在其他臨床變量（包括年齡和臨床分期）中的差異在這些隊(duì)列中并不顯著。

NECTIN4 表達(dá)在人管腔膀胱癌細(xì)胞中富集

人膀??胱癌細(xì)胞系已分為管腔型和基底亞型。泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略發(fā)現(xiàn)NECTIN4 mRNA 表達(dá)在管腔型膀胱癌細(xì)胞系中也有所增加（p<0.0001）, 與管腔轉(zhuǎn)錄因子GATA3的表達(dá)密切相關(guān)（n=36 尿路上皮癌細(xì)胞系，p=0.00007）并且對(duì)細(xì)胞存活不是必需的（基于數(shù)百個(gè)細(xì)胞系的 RNAi 敲低和 CRISPR 敲除）。與基底細(xì)胞系（253JBV、UMUC-3 和 TCCSUP）相比，管腔細(xì)胞系（UMUC-9、HT-1197 和 HT-1376）的細(xì)胞表面內(nèi)源性 NECTIN4 蛋白水平也顯著更高，這與總蛋白表達(dá)相關(guān)水平。

Luminal 細(xì)胞以具有更多上皮形態(tài)的粘聚簇生長(zhǎng)，而基底細(xì)胞具有紡錘形、間充質(zhì)形態(tài)。有趣的是，根據(jù) mRNA 表達(dá)，一些歸類為基礎(chǔ)的膀胱癌細(xì)胞系（即 UMUC-14、VMCUB1 和 647V）也表達(dá)NECTIN4 。泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略驗(yàn)證了其中兩個(gè)細(xì)胞系（UMUC-14 和 647V）中 NECTIN4 的細(xì)胞表面和總蛋白表達(dá)，與 HT-1376 細(xì)胞相比，它們?cè)诩?xì)胞表面表達(dá)可檢測(cè)但較低的 NECTIN4 蛋白。647V 細(xì)胞看起來(lái)更像管腔，而 UMUC-14 細(xì)胞與 UMUC-3 和 TCCSUP 細(xì)胞相比表現(xiàn)出中間形態(tài)，這與 NECTIN4 在細(xì)胞粘附中發(fā)揮作用一致。

NECTIN4 表達(dá)對(duì)于恩諾單抗誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡是必要且充分的

然后泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略研究了管腔細(xì)胞和基底細(xì)胞是否對(duì)恩諾單抗具有不同的基線敏感性，發(fā)現(xiàn) HT-1376 和 HT-1197 管腔細(xì)胞（高內(nèi)源性 NECTIN4）對(duì)恩諾單抗比 UMUC-3 和 TCCSUP 基底細(xì)胞（幾乎沒有內(nèi)源性 NECTIN4）更敏感), 具有很強(qiáng)的抗性。此外，盡管可檢測(cè)到 NECTIN4 表達(dá)水平，但基礎(chǔ) UMUC-14 細(xì)胞對(duì)恩諾單抗誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡具有抗性，而與 HT-1376 細(xì)胞相比，647V 細(xì)胞具有中等敏感性（IC 50 ~3 μg/mL）。綜上所述，這些結(jié)果表明NECTIN4 mRNA 和蛋白表達(dá)在管腔膀胱癌細(xì)胞系中更高，因此，它們對(duì)恩諾單抗誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡也更敏感。

接下來(lái)，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略詢問luminal HT-1376 細(xì)胞中NECTIN4的敲低是否可以消除對(duì)恩諾單抗的敏感性。為此，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略生成了表達(dá)催化失活 dCas9（稱為 CRISPR 干擾或 CRISPRi）的 HT-1376 細(xì)胞，并使用 5 種獨(dú)特的 sgRNA 來(lái)沉默NECTIN4。泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略發(fā)現(xiàn)所有 5 種 sgRNA 都有效地沉默了NECTIN4 mRNA 和 NECTIN4 細(xì)胞表面蛋白表達(dá) > 90%，如通過(guò)定量聚合酶鏈反應(yīng) (qPCR) 和表面蛋白染色檢測(cè)到的。NECTIN4敲低細(xì)胞保留了大致相似的管腔形態(tài)，具有一些紡錘形特征。

重要的是， NECTIN4的缺失導(dǎo)致了恩諾單抗耐藥性。具有強(qiáng)大NECTIN4表達(dá)的 HT-1376 對(duì)照細(xì)胞在 0.02 μg/ml 的恩諾單抗下被有效抑制，而 HT-1376 NECTIN4敲低細(xì)胞需要 1 μg/ml 的恩諾單抗才能被抑制，這代表了 25 倍的靈敏度差異?？寺⌒纬稍囼?yàn)證實(shí)了NECTIN4的缺失賦予對(duì)恩諾單抗的抗性的觀察結(jié)果。NECTIN4的缺失還導(dǎo)致第二種管腔膀胱癌細(xì)胞系 HT-1197 出現(xiàn)恩諾單抗耐藥性。

為了研究NECTIN4表達(dá)是否單獨(dú)介導(dǎo)恩諾單抗誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略在基礎(chǔ) UMUC-3 細(xì)胞系中組成型表達(dá)NECTIN4 。表面蛋白染色和 qPCR 表明 NECTIN4 被強(qiáng)烈表達(dá)。

此外，通過(guò)免疫組化證實(shí)NECTIN4蛋白主要定位于UMUC3-NECTIN4過(guò)表達(dá)（OE）腫瘤異種移植物的細(xì)胞表面；在基底 UMUC3 對(duì)照腫瘤異種移植物中未發(fā)現(xiàn)可檢測(cè)的內(nèi)源性 NECTIN4 蛋白。重要的是，上調(diào)UMUC-3 細(xì)胞中的NECTIN4表達(dá)導(dǎo)致對(duì)恩諾單抗的敏感性顯著增加，如增殖所證明的那樣和克隆形成試驗(yàn)。

泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略在第二個(gè)基底膀胱癌系 TCCSUP 中發(fā)現(xiàn)了類似的結(jié)果。總之，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略的結(jié)果表明NECTIN4表達(dá)是恩諾單抗誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡所必需的，并強(qiáng)調(diào)了以下發(fā)現(xiàn)：i) NECTIN4的下調(diào)或缺失可能是一種重要的耐藥機(jī)制，并且 ii) 誘導(dǎo)NECTIN4表達(dá)會(huì)增加恩諾單抗敏感性。

關(guān)于恩諾單抗靶向藥物基因檢測(cè)對(duì)尿路上皮癌治療的影響

擴(kuò)大晚期尿路上皮癌的治療選擇仍然是一個(gè)關(guān)鍵的未滿足需求，正如恩諾單抗迅速納入三線轉(zhuǎn)移環(huán)境所表明的那樣。新輔助空間也為其他治療做好了準(zhǔn)備——60% 接受現(xiàn)有基于順鉑的方案治療的患者在治好性膀胱切除術(shù)中被發(fā)現(xiàn)有殘留的浸潤(rùn)性疾病，在管腔型腫瘤中獲益不明顯。在這項(xiàng)研究中，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略發(fā)現(xiàn)跨分子亞型的NECTIN4表達(dá)存在顯著異質(zhì)性，在管腔癌中表達(dá)賊高。NECTIN4還與GATA3、FOXA1和PPARG密切相關(guān)，這是已知決定管腔細(xì)胞命運(yùn)的轉(zhuǎn)錄因子。值得注意的是，NECTIN4在 NE 樣亞型中賊低。泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略還發(fā)現(xiàn)NECTIN4表達(dá)在后 NAC CC2 管腔分子亞型中仍然賊高?？偠灾@種變異性可能反映了潛在腫瘤生物學(xué)的差異，并且對(duì)管腔腫瘤對(duì)基于恩諾單抗的新輔助或輔助治療方案的敏感性具有重要意義。有趣的是，>90% 的上尿路尿路上皮腫瘤也是管腔型的，可能表達(dá)更高水平的NECTIN4。

在這里，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略發(fā)現(xiàn)NECTIN4表達(dá)對(duì)于恩諾單抗誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡至關(guān)重要。使用代表性的管腔（HT-1376、HT-1197）和基底（UMUC-3、TCCSUP）細(xì)胞系，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略證明管腔細(xì)胞中NECTIN4的敲低導(dǎo)致恩諾單抗抗性，而 NECTIN4 在基底細(xì)胞中的表達(dá)導(dǎo)致恩諾單抗敏感性。據(jù)泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略所知，這些數(shù)據(jù)新穎正式證明NECTIN4的表達(dá)是尿路上皮癌臨床前細(xì)胞系模型中恩諾單抗治療效果的關(guān)鍵決定因素。泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略的數(shù)據(jù)證實(shí)并建立在現(xiàn)有的臨床前體外和體內(nèi)數(shù)據(jù)。有趣的是，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略發(fā)現(xiàn)一些基底細(xì)胞系表達(dá)NECTIN4 mRNA 和蛋白，包括 647V 和 UMUC-14 細(xì)胞。盡管 647V 細(xì)胞對(duì)恩諾單抗相對(duì)敏感，但 UMUC-14 細(xì)胞具有高度抵抗力，這表明可能還有其他因素會(huì)介導(dǎo)恩諾單抗敏感性（即對(duì) MMAE 有效載荷的敏感性）。

泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略的研究有幾個(gè)重要的局限性。首先，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略在超過(guò) 1,900 個(gè)臨床樣本中的基因表達(dá)數(shù)據(jù)可能不一定反映 NECTIN4 表面蛋白表達(dá)。盡管如此，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略對(duì)幾種可用細(xì)胞系的表面蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)證實(shí) mRNA 和蛋白質(zhì)表達(dá)水平強(qiáng)烈相關(guān)，這與之前證明 mRNA 和蛋白質(zhì)水平之間相關(guān)性的研究一致。此外，根據(jù)轉(zhuǎn)錄組表達(dá)數(shù)據(jù)，使用膀胱癌 TMA 對(duì) NECTIN4 蛋白進(jìn)行的免疫組織化學(xué)染色表明，在管腔亞型中具有更高的 NECTIN4 H 評(píng)分。其次，在這些隊(duì)列中分析的樣本是從原發(fā)性腫瘤組織中獲得的（由于數(shù)據(jù)可用性），可能不一定代表轉(zhuǎn)移性腫瘤中的表達(dá)水平。需要對(duì)轉(zhuǎn)移部位的活組織檢查進(jìn)行額外研究，以更好地表征原發(fā)性腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤之間NECTIN4表達(dá)的異同。此外，不同轉(zhuǎn)移性病灶之間可能存在患者體內(nèi)表達(dá)的異質(zhì)性，這在分析單個(gè)活檢時(shí)未被充分認(rèn)識(shí)。雖然泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略的數(shù)據(jù)表明NECTIN4之間存在相關(guān)性EV 在實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中的表達(dá)和反應(yīng)，未來(lái)的研究應(yīng)該旨在將泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略的發(fā)現(xiàn)與臨床患者在局部和轉(zhuǎn)移環(huán)境中對(duì)恩諾單抗的反應(yīng)相關(guān)聯(lián)，并確定反應(yīng)所需的表達(dá)閾值。賊后，必須承認(rèn)二維細(xì)胞培養(yǎng)的固有局限性，因?yàn)檫@些條件不能概括體內(nèi)腫瘤微環(huán)境和細(xì)胞間相互作用。未來(lái)應(yīng)繼續(xù)研究三維細(xì)胞培養(yǎng)和患者來(lái)源的類器官模型。

可能存在對(duì) ADC 治療的多種耐藥機(jī)制，包括靶標(biāo)表面蛋白表達(dá)的下調(diào)（即“抗原逃逸”）。例如，HER2表達(dá)降低已被證明是HER2靶向 ADC 的潛在耐藥機(jī)制，例如用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌的曲妥珠單抗 emtansine。用 CD19 靶向 ADC 和嵌合抗原治療的 B 細(xì)胞惡性腫瘤患者的 CD19 缺失受體 (CAR)-T 細(xì)胞已被描述。鑒于NECTIN4的明顯異質(zhì)性表達(dá)，引發(fā)細(xì)胞死亡所需的表達(dá)閾值也很重要，需要闡明。其他耐藥機(jī)制可能共存，包括受體內(nèi)化減少、藥物外排泵增加、內(nèi)體運(yùn)輸發(fā)生變化或?qū)τ行ж?fù)載的敏感性降低。賊近的 CRISPR 篩選鑒定出許多內(nèi)體蛋白，包括 C18ORF8 / RMC1，是必需的用于 ADC 功效。有必要對(duì)恩諾單抗治療前后的腫瘤進(jìn)行進(jìn)一步調(diào)查，以確定其他耐藥機(jī)制?；仔秃推渌乔恍湍蚵飞掀ぐ┗颊呤欠駥?duì)恩諾單抗更具抵抗力仍有待確定。此外，在新輔助治療中，迫切需要針對(duì) luminal 亞型的策略，因?yàn)檫@些腫瘤從鉑類化療中獲益較少。未來(lái)的EV臨床試驗(yàn)應(yīng)考慮結(jié)合分子亞型來(lái)預(yù)測(cè)治療反應(yīng)，并探索EV 在新輔助、輔助和膀胱內(nèi)治療環(huán)境中早期疾病狀態(tài)中的療效。

基因解碼基因檢測(cè)對(duì)膀胱癌等尿路上皮癌靶向藥物的選擇作用

泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略的研究表明，NECTIN4 mRNA 表達(dá)在膀胱癌的管腔亞型（LumNS、LumP 和 LumU）中賊高，并且在新輔助順鉑治療后的管腔腫瘤中持續(xù)升高。NECTIN4表達(dá)與幾種管腔轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)相關(guān)，包括GATA3、FOXA1和PPARG。在膀胱癌的細(xì)胞系模型中，NECTIN4表達(dá)水平與恩諾單抗敏感性相關(guān)。此外，在人管腔膀胱癌細(xì)胞系中，EV 誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡需要NECTIN4 ，并且可以通過(guò)表達(dá)NECTIN4來(lái)誘導(dǎo)恩諾單抗敏感性在基底膀胱癌細(xì)胞系中。評(píng)估恩諾單抗療效的臨床試驗(yàn)應(yīng)強(qiáng)烈考慮在治療前對(duì)患者進(jìn)行分子亞型分類。

恩諾單抗（Enfortumab Vedotine）基因檢測(cè)靶向治療膀胱癌的要點(diǎn)

Enfortumab vedotin (EV) 是一種靶向 NECTIN4 的抗體藥物偶聯(lián)物，賊近被批準(zhǔn)用于治療難治性轉(zhuǎn)移性尿路上皮癌。NECTIN4 是一種與細(xì)胞間粘附有關(guān)的細(xì)胞表面蛋白，被認(rèn)為在原發(fā)性膀胱腫瘤中普遍表達(dá)。然而，在早期的臨床試驗(yàn)中，EV 的反應(yīng)率一直存在差異。泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略試圖確定NECTIN4表達(dá)是否在膀胱癌的分子亞型中存在異質(zhì)性。使用來(lái)自 7 個(gè)臨床隊(duì)列和 >1,900 個(gè)患者樣本的基因表達(dá)數(shù)據(jù)，泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略發(fā)現(xiàn)與基礎(chǔ)、神經(jīng)內(nèi)分泌或富含基質(zhì)的亞型相比，NECTIN4表達(dá)在膀胱癌的管腔分子亞型中賊高。連接蛋白4表達(dá)對(duì)于尿路上皮癌管腔和基底細(xì)胞系模型中的恩諾單抗敏感性以及NECTIN4的下調(diào)誘導(dǎo)對(duì)恩諾單抗的抗性既是必要的也是充分的。泌尿科腫瘤治療的靶向藥物策略的研究結(jié)果支持使用分子亞型來(lái)預(yù)測(cè)恩諾單抗反應(yīng)，并可能對(duì)臨床試驗(yàn)中的患者選擇和生物標(biāo)志物開發(fā)產(chǎn)生影響。