【佳學基因檢測】TCRgamm/delta免疫細胞療效的DNA解碼

人類V_γ9V_δ2 T細胞是一種獨特的T細胞類型，近期對V_γ9V_δ2 T細胞的研究數(shù)據(jù)強調了它們在癌癥免疫治療中的潛在相關性。V_γ9V_δ2 T細胞具有雙重特性，因為它們既是抗原呈遞細胞，也對癌細胞具有細胞毒作用。大部分V_γ9V_δ2 T細胞在共受體CD4和CD8上均呈陰性，只有20-30%的細胞表達CD8。盡管它們大多被忽視，但少部分V_γ9V_δ2 T細胞也表達共受體CD4。作者在這里顯示，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞占外周血V_γ9V_δ2 T細胞的0.1-7%。這些細胞可以通過使用來普酸、帕米酸或與IL-2和飼養(yǎng)細胞來擴增。與大多數(shù)傳統(tǒng)的CD4⁺ αβ T細胞不同，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞具有強大的細胞毒性，可以殺死癌細胞。這里通過對待以來普酸的不同組織來源的癌細胞株（包括乳腺癌、前列腺癌和黑色素瘤細胞株）的殺傷來展示這一點。值得注意的是，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞的殺傷能力與CD56的共表達相關。

_γ_δ T細胞是一種T細胞亞群，它們表達由_γ鏈和_δ鏈組成的T細胞受體（TCR），而不是α和β TCR鏈。_γ_δ T細胞比αβ T細胞少得多，在人體外周血中，主要的_γ_δ T細胞亞群是V_γ9V_δ2 T細胞。這些細胞僅在人類和高等靈長類動物（以及羊駝）中發(fā)現(xiàn)，占外周血淋巴細胞的0.5-5%。

與需要HLA I類和II類分子進行抗原識別的αβ T細胞不同，V_γ9V_δ2 T細胞以HLA非限制方式應答一組稱為磷酸抗原（pAg）的小型非肽分子。V_γ9V_δ2 T細胞識別pAg的確切機制尚未有效理解。V_γ9V_δ2 T細胞識別pAg的確切機制尚未有效理解。然而，pAg與丁酸酸分子，特別是丁酸酸3A1和2A1之間的相互作用，對V_γ9V_δ2 TCR正確識別pAg是必要且充分的。異戊烯焦磷酸（IPP）是一種pAg，是所有生物細胞利用的mevalonate途徑和非mevalonate途徑的終產(chǎn)物。為此，應激誘導的IPP水平升高可以激活V_γ9V_δ2 T細胞，而自然產(chǎn)生的IPP水平則不足以激活。癌細胞產(chǎn)生的IPP水平高于正常細胞，因此可以被V_γ9V_δ2 T細胞感知。這表明V_γ9V_δ2 T細胞可能具有作為應激感應T細胞的作用，并在識別癌細胞方面發(fā)揮潛在的關鍵作用。

V_γ9V_δ2 T細胞識別pAg的確切機制尚未有效理解。然而，pAg與丁酸酸分子，特別是丁酸酸3A1和2A1之間的相互作用，對V_γ9V_δ2 TCR正確識別pAg是必要且充分的。異戊烯焦磷酸（IPP）是一種pAg，是所有生物細胞利用的mevalonate途徑和非mevalonate途徑的終產(chǎn)物。為此，應激誘導的IPP水平升高可以激活V_γ9V_δ2 T細胞，而自然產(chǎn)生的IPP水平則不足以激活。癌細胞產(chǎn)生的IPP水平高于正常細胞，因此可以被V_γ9V_δ2 T細胞感知。這表明V_γ9V_δ2 T細胞可能具有作為應激感應T細胞的作用，并在識別癌細胞方面發(fā)揮潛在的關鍵作用。

V_γ9V_δ2 T細胞是人類外周血單個核細胞中最主要的也是了解最清楚的_γ_δT細胞亞群。這些細胞容易在佳學基因免疫細胞生產(chǎn)技術體系中容易獲得極高的純度和大幅度的擴增。佳學基因致力于開發(fā)細胞療法，以補充現(xiàn)在的腫瘤浸潤淋巴細胞療法。如果顯示出優(yōu)越性，有可能替代它們。因此，佳學基因檢測全面研究了V_γ9V_δ2 T細胞，因為它們可以直接從外周血單個核細胞中擴增，并且具有特異性殺傷癌細胞的能力。

在佳學基因的擴增培養(yǎng)的研究中，反復觀察到一小部分CD4⁺_γ_δT細胞。由于V_γ9V_δ2 T細胞可以通過不同的nBP擴增，佳學基因研究了ZOL和PAM是否可以在體外不同程度地擴增CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞。在PAM和ZOL擴增的培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)了不同的CD4⁺細胞群體。然而，在CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞的頻率上并沒有明顯差異，盡管在某些培養(yǎng)中ZOL似乎更有利于CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞。

為了評估CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞的存在是否表明它是人類外周血V_γ9V_δ2 T細胞的真實亞群，抑或只是體外擴增培養(yǎng)形成的獨物細胞群，佳學基因對來自健康人的外周血單個核細胞進行了流式細胞術分析。佳學基因發(fā)現(xiàn)，在所有測試的健康人中確實存在少量但明顯的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞（占V_γ9V_δ2 T細胞的0.1-7%）。由于V_γ9V_δ2 T細胞，能夠識別癌細胞，佳學基因檢測在腫瘤患者的白細胞分離樣本中尋找CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞。結果顯示，在這些樣本中也存在數(shù)量相近的獨特細胞群體。因此，佳學基因免疫細胞治療的研究清楚地表明CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞不僅存在于佳學基因體外培養(yǎng)的免疫細胞中，這一功能細胞群同樣也存在于癌癥患者的免疫細胞中。

佳學基因解碼的研究表明，人體內的αβ T細胞上的CD8分子通過與HLA-I分子相互作用發(fā)揮協(xié)同刺激作用。同樣，對于CD4⁺αβ T細胞，CD4分子與HLA-II分子相互作用并向T細胞提供協(xié)同刺激信號。但是，沒有基因解碼的參與，關于CD8在V_γ9V_δ2 T細胞中的作用知之甚少，并且DN和CD8⁺ V_γ9V_δ2 T細胞之間的差異沒有得到清晰的描述。因此，佳學解碼基因更詳細地研究CD8和CD4在V_γ9V_δ2 T細胞中的潛在作用?？紤]到體內CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞的存在比例較低，佳學基因解碼DNA試圖通過體外擴增后再研究這些細胞，以便更全面地研究它們的表型和功能。佳學基因免疫細胞療法利用FACS和REP獲得了純凈的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞亞群。這些經(jīng)過培養(yǎng)的細胞在體外培養(yǎng)過程中保持純度，并且CD4的表達穩(wěn)定。在治療性免疫細胞的究過程中，其他機構嘗試了多次純化CD8⁺ V_γ9V_δ2 T細胞。然而，與CD4相比，這并不成功。佳學基因研究了這些結果，因為與CD4⁺ T細胞（0.1-7%）相比，通過培養(yǎng)可以獲得CD8⁺（20-30%）T細胞要多得多。在這些由其他機構開展的基因檢測與免疫療法的研究中，免疫細胞提供者制備了多個純凈的FACS分選CD8⁺ V_γ9V_δ2 T細胞培養(yǎng)物，但是在擴增后純度降至45-85％，剩余的細胞為DN細胞。同樣，佳學基因檢測還觀察到，分選的DN V_γ9V_δ2 T細胞在擴增后轉變?yōu)楹?-20%的CD8⁺細胞。分選的CD8⁺和DN V_γ9V_δ2 T細胞培養(yǎng)物中仍無法檢測到CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞。盡管在BD FACSAria流式細胞儀分選時使用了保守的篩選策略以去除其他細胞亞群（這一策略在分選CD4 _γ_δ T細胞時被證明是非常有效的），并且分選了五個不同的批次，但無法正式排除分選期間的污染。雖然佳學基因還沒有有效證實這一理論，但基因解碼表明，表明CD8⁺和DN V_γ9V_δ2 T細胞之間存在持續(xù)的轉化，反之亦然。

正如佳學基因免疫細胞治療的研究所揭示的那樣，V_γ9V_δ2 T細胞可以在由nBP致敏后殺死癌細胞。對佳學基因的解碼基因過程進行仔分析后發(fā)現(xiàn)，有一項DNA解碼描述了CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞在健康人外周血單個核細胞和V_γ9V_δ2 T細胞的體外擴增培養(yǎng)存在，并證明這些培養(yǎng)后的T細胞表現(xiàn)出Th1細胞因子分泌譜。然而，除了細胞因子釋放之外，沒有進行功能性試驗。利用純凈且穩(wěn)定的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞培養(yǎng)物，佳學基因發(fā)現(xiàn)在nBP致敏后，前列腺癌、黑色素瘤和乳腺癌細胞被這一免疫細胞殺死的情況。雖然傳統(tǒng)的CD4⁺ T細胞通常不具有細胞毒性，但是基因解碼研究發(fā)現(xiàn)了具有細胞毒性的CD4⁺ αβ T細胞，它們通過在HLA-II分子背景下識別腫瘤抗原直接殺傷腫瘤細胞，或者通過釋放細胞因子激活其他免疫細胞間接殺傷。直接殺傷需要表達HLA-II分子，這在黑色素瘤中是一個常見現(xiàn)象；然而，大多數(shù)其他實體癌都對HLA-II呈陰性。其他研究機構還無法揭示CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞培養(yǎng)物識別癌細胞的識別元素的任何信息，這實際上可能依賴于多種分子。

CD56在許多細胞類型上表達，但佳學基因指出CD56的表達在自然殺傷細胞和細胞毒性T細胞上的表達最明顯。在研究CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞的表型和功能過程中，佳學基因還研究了CD56分子的表達。CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞上CD56表達的呈出雙模形式，而在REP培養(yǎng)中，所有的CD8⁺和DN V_γ9V_δ2 T細胞都是CD56⁺。區(qū)分CD56⁺和CD56- CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞培養(yǎng)物使佳學基因能夠研究這些細胞的細胞溶解能力是否與CD56的表達相關。佳學基因的研究表明，CD56的表達與CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞培養(yǎng)物的細胞毒活性相關，如使用從五個健康人的針對前列腺癌細胞系的培養(yǎng)物顯示出相似的結果。這說明表達CD56的V_γ9V_δ2 T細胞群體比CD56-亞群具有更強的細胞毒性效應，并且這種細胞毒性功能是在刺激增殖的過程中獲得的。佳學基因的研究還發(fā)現(xiàn)CD56⁺ V_γ9V_δ2 T細胞能更有效地殺傷人類鱗狀細胞癌細胞。此外，表達CD56的αβ T細胞具有更強的細胞毒性效應和促炎癥細胞因子產(chǎn)生，如IFN_γ和TNFα]。DNA解碼還觀察到，表達CD56的V_γ9V_δ2 T細胞中，IFN_γ、TNFα和CD107a的細胞因子表達增加。然而，在DNAM-1、NKG2D和NCR的表達上沒有發(fā)現(xiàn)差異。綜上所述，佳學基因認為CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞殺傷能力與CD56的表達相關。

佳學基因免疫細胞療效的基因解碼研究了腫瘤活檢樣本（來自39種癌癥的約18,000個樣本），在影響腫瘤患者預后的22種種因素中，_γ_δ T細胞排在首位。盡管如此，V_γ9V_δ2 T細胞的臨床試驗顯示出有限的臨床成功?？赡苡泻芏嘣?，免疫細胞界對V_γ9V_δ2 TCR多樣性的理解有限，對受體-配體相互作用的認識也受限，對V_γ9V_δ2 T細胞種群的功能多樣性影響的低估也是一個問題。佳學基因發(fā)現(xiàn)，在V_γ9V_δ2 T細胞庫中的克隆之間，腫瘤識別存能力變化是出奇地大，這表明V_γ9V_δ2 T細胞的多樣性可能在功能上非常重要。V_γ9V_δ2 T細胞是人類胎兒中最早發(fā)育的T細胞之一，并且在青春期通過與微生物（即微生物教育）的個體接觸，V_γ9V_δ2 T細胞的多樣性逐漸降低。因此，每個成年人的_γ_δ T細胞庫在_γ_δTCR多樣性和可能的功能多樣性方面都是獨特的。因此，目前對V_γ9V_δ2 T細胞庫內多樣性的理解受到佳學基因關注。免疫能力基因解碼的數(shù)據(jù)提供了關于存在于健康和癌癥患者的V_γ9V_δ2 T細胞種群內的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞了解，從而有助于更好地了解V_γ9V_δ2 T細胞的多樣性。需要注意的是，在基因解碼過程中，V_γ9V_δ2 T細胞培養(yǎng)物受到大量IL-2的影響。因此，這項研究的弱點在于作者無法排除CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞的反應性與CD56的相關性是否是由于體外使用高濃度IL-2引起的假象。需要進行其他研究以確定這些細胞是否在體內與免疫系統(tǒng)的獨特功能相互作用，包括這些細胞是否在自發(fā)或治療誘導的免疫反應中對癌癥發(fā)揮作用。

免疫細胞的療效研究表明V_γ9V_δ2 T細胞中有一小部分表達輔助受體CD4，佳學基因的數(shù)據(jù)支持了這一存在。基于免疫力大小的基因解碼，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞可以在健康人群和癌癥患者的PBMC中找到，占外周血V_γ9V_δ2 T細胞的0.1％至7％。佳學基因描述CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞殺死癌細胞的能力，而且殺傷能力與CD56的表達相關。佳學基因開發(fā)了細胞毒性CD4⁺ V_γ9V_δ2 T細胞細胞的分離培養(yǎng)方法，獲得了V_γ9V_δ2 T細胞的細胞毒性的標記。