【佳學(xué)基因檢測】軟骨發(fā)育不全基因檢測
軟骨發(fā)育不全的標(biāo)準(zhǔn)共識
軟骨發(fā)育不全 (ACH) 是一種骨骼發(fā)育不良,表現(xiàn)為肢體縮短、身材矮小和特征性面部形態(tài)。軟骨發(fā)育不全 (ACH) 是由FGFR3等基因突變引起的。以FGFR為例, 基因解碼表明FGFR3出現(xiàn)或存的基因突變導(dǎo)致FGFR3不斷激活并激活其下游細(xì)胞內(nèi)信號通路。 這導(dǎo)致軟骨細(xì)胞分化和增殖受到抑制,進(jìn)而損害軟骨內(nèi)骨化并導(dǎo)致短肢身材矮小。 軟骨發(fā)育不全 (ACH) 還會引起特征性的臨床癥狀,包括枕骨大孔狹窄、心室擴(kuò)大、睡眠呼吸暫停、上氣道狹窄、中耳炎、胸廓狹窄、椎管狹窄、脊柱后凸和下肢畸形。 考慮到軟骨發(fā)育不全 (ACH) 患者缺乏高水平的證據(jù)和臨床指南,佳學(xué)基因等收庥集了該疾病的臨床實(shí)用指南,以幫助醫(yī)療保健專業(yè)人員和患者在特定的臨床情況下做出適當(dāng)?shù)臎Q定。
軟骨發(fā)育不全所需要考慮的問題
CQ1:是否建議使用顱腦 MRI 來識別枕骨大孔狹窄導(dǎo)致的脊髓受壓?
建議進(jìn)行顱腦 MRI 以確定枕骨大孔狹窄導(dǎo)致的脊髓受壓。 (推薦等級1,證據(jù)等級B)
CQ2:枕骨大孔減壓術(shù)對于枕骨大孔狹窄導(dǎo)致的脊髓受壓有效嗎?
建議采用枕骨大孔減壓術(shù)來治療因枕骨大孔狹窄導(dǎo)致的脊髓受壓,這些狹窄與神經(jīng)系統(tǒng)癥狀、神經(jīng)系統(tǒng)異常表現(xiàn)和中樞呼吸系統(tǒng)疾病相關(guān)。 (推薦等級1,證據(jù)等級B)
CQ3:頭顱 MRI 對識別腦積水有用嗎?
建議進(jìn)行 MRI 頭顱檢查以識別腦室擴(kuò)大并伴有神經(jīng)系統(tǒng)癥狀(腦積水)。 (推薦等級1,證據(jù)等級B)
CQ4:分流手術(shù)對于控制心室擴(kuò)大有效嗎?
建議進(jìn)行分流手術(shù)來治療與神經(jīng)系統(tǒng)癥狀(腦積水)相關(guān)的腦室擴(kuò)大。 (推薦等級1,證據(jù)等級C)
CQ5:睡眠呼吸暫停推薦哪些診斷方法?
根據(jù)情況選擇簡單的睡眠研究和多導(dǎo)睡眠圖。 (推薦等級1,證據(jù)等級C)
CQ6:正壓通氣對于治療阻塞性睡眠呼吸暫停有用嗎?
建議采用正壓通氣來治療阻塞性睡眠呼吸暫停。 (推薦2級,證據(jù)級別B)
CQ7:扁桃體切除術(shù)或腺樣體切除術(shù)對于治療阻塞性睡眠呼吸暫停有用嗎?
當(dāng)阻塞性睡眠呼吸暫停伴有扁桃體/腺樣體肥大時(shí),我們建議進(jìn)行手術(shù)治療。 (推薦2級,證據(jù)級別B)
CQ8:軟骨發(fā)育不全期間是否會出現(xiàn)肺動脈高壓?
(推薦等級無,證據(jù)等級D)
CQ9:脊柱減壓對于治療椎管狹窄有用嗎?
建議進(jìn)行脊柱減壓來治療與神經(jīng)系統(tǒng)癥狀相關(guān)的椎管狹窄。 (推薦等級1,證據(jù)等級B)
CQ10:發(fā)育障礙的發(fā)生頻率是多少?
25% 的病例出現(xiàn)言語遲緩。 (推薦等級1,證據(jù)等級C)
CQ11:肢體延長術(shù)什么年齡合適?
我們建議,在知情同意的情況下,12 歲之后就可以進(jìn)行腿部延長手術(shù)。 (推薦等級2,證據(jù)級別D)
軟骨發(fā)育不全的疾病介紹
軟骨發(fā)育不全(MIM 100800,以下簡稱“ACH”)是一種骨骼發(fā)育不良,表現(xiàn)為肢體縮短和身材矮小。盡管軟骨發(fā)育不全的確切發(fā)生率根據(jù)不同的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)有很大差異,但是佳學(xué)基因的全球協(xié)作聯(lián)盟估計(jì),全世界有超過 250,000 人患有軟骨發(fā)育不全,每10,000 至30,000 名新生兒中就有 1 人患有軟骨發(fā)育不全。
其特征是明顯的根莖短肢身材矮小、特征性的面部形態(tài)(顱骨較大、前額突出、鼻梁扁平、中面部發(fā)育不全、下頜骨相對突出)以及手的三叉戟形態(tài)。 X 線平片顯示管狀骨縮短,直徑增加,長骨干骺端寬且不規(guī)則,呈杯狀,股骨頸縮短,腓骨長于脛骨,腰椎蒂之間的距離變窄,后側(cè)扇形 腰椎體、坐骨切跡變窄、髖臼頂水平、顱底縮短和面部發(fā)育不全。 有時(shí)在新生兒期會觀察到扁椎病。 當(dāng)癥狀和骨X射線圖像一致時(shí)即可做出診斷。 在胎兒期觀察到頭圍增大(第 97 個百分位數(shù)以上)、股骨縮短(第 5 個百分位數(shù)以下)和三叉戟手。 軟骨發(fā)育不全 (ACH) 的特征性臨床癥狀和放射學(xué)表現(xiàn)從新生兒期開始觀察,盡管大約 20% 的患者此時(shí)尚未確診。 軟骨發(fā)育不全 (ACH)還觀察到枕大孔狹窄、心室擴(kuò)大、睡眠呼吸暫停、上氣道狹窄、中耳炎、胸廓狹窄、椎管狹窄、脊柱后凸、下肢畸形和關(guān)節(jié)過度伸展。根據(jù)《人體基因序列變化與疾病表征》,通過分析17例軟骨發(fā)育不全(achondroplasia,ACH)患兒的臨床特征及成纖維細(xì)胞生長因子受體3(fibroblast growth factor receptor 3,F(xiàn)GFR3)基因變異情況。這17個病例是佳學(xué)基因采用回顧性分析,對2009年1月至2021年10月確診的17例ACH患兒臨床資料及FGFR3基因檢測結(jié)果進(jìn)行總結(jié)與比較。 結(jié)果表明:軟骨發(fā)育不全 (ACH)賊常見的臨床表現(xiàn)是不勻稱型身材矮?。?00%,17/17)、大頭畸形(100%,17/17)、三叉戟手畸形(82%,14/17)、膝內(nèi)翻(88%,15/17)。賊普遍的影像學(xué)是根莖狀長骨縮短(100%,17/17)和腰椎椎間距變窄(88%,15/17)。主要并發(fā)癥有骨骼異常(100%,17/17)、中耳功能障礙(82%,14/17)、運(yùn)動及語言發(fā)育遲緩(88%,15/17)、慢性疼痛(59%,10/17)、睡眠呼吸暫停(53%,9/17)、肥胖(41%,7/17)、枕骨大孔縮?。?5%,6/17)、腦積水(24%,4/17)。17例患者均通過致病基因鑒定基因解碼找到致病性突變,即均存在FGFR3基因變異,檢出率為100%。 13例為FGFR3基因c.1138G>A的熱點(diǎn)突變;2例FGFR3基因c.1138G>C變異;2例為佳學(xué)基因新發(fā)現(xiàn)的突變。該2例病像如采用數(shù)據(jù)庫比對的方法,檢測結(jié)果為陰性。其中1例FGFR3基因c.1252C>T變異,1例FGFR3基因c.445+2_445+5delTAGG變異。
軟骨發(fā)育不全所需要用的基因檢測技術(shù)
FGFR3基因熱點(diǎn)突變檢測:采集患兒及父母外周血2 mL,使用DNA試劑盒提取基因組DNA,對患兒及父母的FGFR3基因第9號外顯子和鄰近內(nèi)含子區(qū)域進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增,引物序列為正向5'-GGTCTGGCCCTCTAGACTCA-3'和反向5'-CGTGCCCCAAAGTACCCTAG-3'。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳,獲得目的帶后,佳學(xué)基因進(jìn)一步采用一代測序進(jìn)行高精度測序分析。突變位點(diǎn)采用Chromos與Mutation Surveyor V4.0.6軟件分析。
全外顯子基因測序分析:采集患兒及父母外周血2 mL。使用Gen Exome Research Panel v1.0(Integrated DNA Technologies,美國)試劑盒進(jìn)行外顯子捕獲實(shí)驗(yàn),Illumina HiSeq 4000測序儀雙端150 bp測序模式測序。測序原始數(shù)據(jù)經(jīng)過BWA和SAMtools軟件分析,使用GATK V3.70對變異進(jìn)行識別。全外顯子設(shè)計(jì)針對檢測出變異的Sanger測序擴(kuò)增引物,PCR擴(kuò)增,通過Sanger測序在患兒及父母中驗(yàn)證外顯子測序發(fā)現(xiàn)的變異。
軟骨發(fā)育不全的致病基因分析
軟骨發(fā)育不全(achondroplasia,ACH;OMIM #100800)是人類賊常見的侏儒癥,臨床特征包括不成比例的身材矮小、大頭畸形與前額突出、面中部發(fā)育不全、脛骨彎曲等。致病基因鑒定基因解碼技術(shù)將ACH致病基因確定為成纖維細(xì)胞生長因子受體3(fibroblast growth factor receptor 3,F(xiàn)GFR3)基因。ACH是一種常染色體顯性遺傳病,具有100%的外顯率?;蚪獯a顯示超過97%的病例是由位于4號染色體短臂上FGFR3基因跨膜結(jié)構(gòu)域的錯義突變(p.G380R)引起的,約80%的病例是由于健康父母所生患者的新發(fā)突變所致,與父系年齡效應(yīng)相關(guān),另外約20%是由家族遺傳所致。佳學(xué)基因的中國特異性人群基因檢測結(jié)果顯示99%(208/210)基因變異為熱點(diǎn)突變,僅有2例為新發(fā)未報(bào)道變異,且大部分研究為個案報(bào)道,樣本量小。佳學(xué)基因其中17例ACH的臨床特征、并發(fā)癥及基因變異進(jìn)行總結(jié),發(fā)現(xiàn)了2例未報(bào)道基因變異,對擴(kuò)充ACH基因庫意義重大。
FGFR3 基因的 Gly380Arg 突變位于染色體 4p26.3,在 ≥ 97% 的 ACH 患者中觀察到(幾乎總是 c.1138G>A,但有時(shí) c.1138G>C),并且基因型同質(zhì)性很高。 該疾病的特點(diǎn)是常染色體顯性遺傳,盡管大約 80% 的病例是由于健康父母所生患者的新自發(fā)突變所致。
基因解碼揭示基因突變是疾病發(fā)生原因的科學(xué)依據(jù)
FGFR3 與 FGF18 或 FGF9 結(jié)合,當(dāng)它經(jīng)歷自身磷酸化時(shí),它會激活下游細(xì)胞內(nèi)信號分子。 沿著這條路線,它從 FRS2α 傳遞到 GRB、SOS 和 RAS,并通過 Raf/MEK/ERK 途徑激活轉(zhuǎn)錄因子 Sox9。 一種途徑抑制軟骨細(xì)胞肥大,而另一種途徑則導(dǎo)致 Stat1 激活,Stat1 進(jìn)而激活 p21 并抑制軟骨細(xì)胞增殖。
當(dāng) FGFR3 因軟骨發(fā)育不全 (ACH) 發(fā)生突變時(shí),它會持續(xù)激活,使 FGF 受體自磷酸化,并導(dǎo)致下游細(xì)胞內(nèi)信號分子 Raf/MEK/ERK 和 Stat1 的激活。 這導(dǎo)致軟骨細(xì)胞分化以及軟骨基質(zhì)產(chǎn)生和增殖受到抑制。 這反過來又會損害軟骨內(nèi)骨化(軟骨形成骨骼的過程),導(dǎo)致長骨伸展不良,從而導(dǎo)致患者出現(xiàn)短肢侏儒癥。
構(gòu)成椎體和顱底的大部分骨骼是通過軟骨內(nèi)骨化形成的; 因此,上述骨骼的骨化受到損害,導(dǎo)致枕骨大孔狹窄、腦室擴(kuò)大、腦脊液循環(huán)不良引起的腦積水和椎管狹窄。
病例 | 性別 | 就診年齡 | 就診生長或身高(cm)/百分位數(shù) | 主訴 | FGFR3基因變異位點(diǎn) | 遺傳來源 | 父親受孕年齡 (歲) | 目前年齡(歲) | 目前身高(cm)/百分位數(shù) |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
1 | 男 | 11.3歲 | 103.1/P 3~P 10 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 新發(fā)突變 | 35 | 18 | 130 |
2 | 女 | 8.5歲 | 93.6/P 3~P 10 | 身材矮小 | c.1138G>C(p.G380R) | 新發(fā)突變 | 39 | 16 | 120 |
3 | 女 | 2.3歲 | 71.7/P 3~P 10 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 新發(fā)突變 | 42 | 11 | 100/<P 3 |
4 | 男 | 1.5歲 | 63.6/<P 3 | 身材矮小 | c.1138G>C(p.G380R) | 母源 | 23 | 5.6 | 87/P 10~P 25 |
5 | 女 | 6.5歲 | 88/P 10 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 母源 | 26 | 18.4 | 120 |
6 | 男 | 2.1歲 | 70.6/P 10 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 母源 | 30 | 13.8 | 117 |
7 | 女 | 1.2歲 | 64.4/P 25 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 母源 | 27 | 2.5 | 67/<P 3 |
8 | 男 | 3歲 | 71.8/<P 3 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 新發(fā)突變 | 46 | 15.3 | 118 |
9 | 男 | 1.3歲 | 63/P 3~P 10 | 發(fā)育落后、抽搐 | c.1258C>T(p.P420S) | 父源 | 36 | 3.5 | 70/<P 3 |
10 | 男 | 0.75歲 | 60/P 3~P 10 | 發(fā)育落后、抽搐 | c.1144G>A(p.G382R) | 新發(fā)突變 | 41 | 3.7 | 66/<P 3 |
11 | 男 | 0.7歲 | 65/P 25 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 父源 | 36 | 5.1 | 82/P 3~P 10 |
12 | 女 | 1 d | 48/P 25~P 50 | 胎兒期股骨短小、頭顱大 | c.1138G>A(p.G380R) | 新發(fā)突變 | 35 | 0.5 | 57/P 10~P 25 |
13 | 男 | 1.6歲 | 68/P 25 | 身材矮小 | c.445+2_445+5delTAGG | 父源 | 27 | 3.8 | 77/P 3~P 10 |
14 | 男 | 3.2歲 | 74.7/P 3 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 新發(fā)突變 | 32 | 17.3 | 131 |
15 | 女 | 8.3歲 | 95.8/P 10 ~P 25 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 新發(fā)突變 | 29 | 18.6 | 121 |
16 | 女 | 3.8歲 | 77/P 10 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 新發(fā)突變 | 50 | 15.3 | 102 |
17 | 男 | 10.1歲 | 98.9/P 3~P 10 | 身材矮小 | c.1138G>A(p.G380R) | 新發(fā)突變 | 39 | 11.8 | 103/P 3~P 10 |
可以對本文內(nèi)容進(jìn)行佐證的科學(xué)依據(jù)
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6958518/
(責(zé)任編輯:佳學(xué)基因)