【佳學基因檢測】腫瘤基因檢測與病理切片分析如何對應起來
基因解碼基因檢測如何審核免疫組織化學染色病理結(jié)果
對獲得的FFPE腫瘤組織的樣本進行基因檢測驗證后的MMR蛋白(MLH-1、MSH-2、MSH-6和PMS-2)進行免疫組織化學(IHC)染色,并由資深分子病理學家(HSH)對結(jié)果進行核對。此外,對手術(shù)切除的結(jié)直腸癌和胃癌(GC)患者(N=24)的組織進行CD3、CD4、CD8、FoxP3和PD-1的全玻片IHC染色。簡而言之,4 每例FFPE腫瘤組織的µm厚代表性切片在二甲苯中脫蠟,并在乙醇系列中水合。阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和熱誘導抗原回收后,腫瘤切片在室溫下培養(yǎng)32小時 清洗后,腫瘤切片進一步與抗鼠或抗Rabbit二級抗體孵育30分鐘 切片用iView DAB檢測試劑盒(美國亞利桑那州圖森市文塔納醫(yī)療系統(tǒng)公司)處理,并用蘇木精復染。上述程序是使用基準XT autostainer系統(tǒng)(Ventana)執(zhí)行的。主要抗體的制造商和稀釋率見在線
基因解碼基因檢測如何進行基于數(shù)字圖像的腫瘤免疫細胞群定量從而校正基因檢測的臨床意義
使用全景250(匈牙利布達佩斯3DHISTECH)從CD3、CD4、CD8、FoxP3和PD-1免疫染色玻片中獲得全玻片圖像,以量化TIL種群的密度。使用QuPath V.0.1.2.22標記每張幻燈片圖像的整個腫瘤區(qū)域和外侵襲邊緣。外侵襲邊緣被定義為間質(zhì)區(qū)域 腫瘤-基質(zhì)界面外µm。使用QuPath程序中的陽性細胞檢測模塊對腫瘤區(qū)域的陽性細胞進行計數(shù)。作者反復校準每個免疫染色標記物的DAB信號截止值(HSH)。腫瘤區(qū)域和外侵襲邊緣的陽性細胞密度計算為陽性細胞數(shù)除以腫瘤區(qū)域測量值(細胞計數(shù)/mm2)(在線補充圖1A-C)。我們發(fā)現(xiàn)腫瘤區(qū)域和外侵襲邊緣的免疫細胞密度密切相關(guān)(R=0.72–0.93,所有比較p<0.001)(數(shù)據(jù)未顯示);因此,我們在其他分析中使用了腫瘤區(qū)域的免疫細胞密度。
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