【佳學(xué)基因檢測】男性生殖基因檢測標(biāo)準(zhǔn)與專家共識
不孕不育已成為一個全球性的社會問題,影響 著全世界約10% 的育齡夫婦,其中男性不育約占 50%[1]。遺傳學(xué)異常是男性不育的重要病因之一, 涉及多種疾病,例如由于染色體異常或基因變異導(dǎo)致的非梗阻性無精子癥可高達(dá) 25%[2],并且隨著二代測序( next generation sequencing,NGS) 技術(shù)開始應(yīng)用于男性生殖領(lǐng)域,且比例逐年升高。遺傳學(xué)檢測已進(jìn)入多個歐美男性生殖相關(guān)臨床指南和共識, 這些指南與共識均建議對嚴(yán)重少精子癥和無精子癥患者進(jìn)行Y染色體微缺失篩查,對先天性雙側(cè)輸精管缺如患者進(jìn)行 CFTR基因檢測等[3-6]。對致病基因進(jìn)行檢測,可明確男性不育病因,有助于治療藥物選擇,預(yù)測睪丸外科取精成功概率以及判斷輔助生殖技術(shù)治療預(yù)后,并為患者提供遺傳學(xué)咨詢。有鑒于此,為了規(guī)范男性生殖相關(guān)基因檢測臨床應(yīng)用,中 華醫(yī)學(xué)會男科學(xué)分會組織本領(lǐng)域?qū)<覍ο嚓P(guān)基因檢測適應(yīng)證、檢測方法、檢測內(nèi)容和檢測意義等方面進(jìn)行歸納總結(jié),并結(jié)合我國的具體臨床實踐形成共識。
1、非梗阻性無精子癥和重度少精子癥
非梗 阻性無精子 癥 ( non-obstructive azoospermia,NOA) 和重度少精子癥約占男性不育患者總數(shù) 的 10% ~ 20% 。其中,染色體核型異常和 Y 染色體微缺失可解釋 15% ~ 20% 的NOA及重度少精子 癥[7]。除此之外,近年來已有較多研究證實多個單基因變異可導(dǎo)致 NOA。
1. 1 Y 染色體微缺失
1. 1. 1 概述
Y 染色體長臂上存在著控制睪丸發(fā)育、精子發(fā)生及維持的區(qū)域,稱為無精子癥因子 ( azoospermia factor,AZF) [8],該區(qū)域易發(fā)生同源重 組,從而導(dǎo)致缺失或重復(fù),引起少精子癥或無精子 癥。AZF 微缺失可解釋 7. 8% 的 NOA 和重度少精子癥[9]。根 據(jù) 缺失模 式,AZF主要劃分為AZFa、AZFbAZFc 三個區(qū)域。最常見的缺失類型為 AZFc b2 /b4 亞型,占 60. 32%[9]。
1. 1. 2 臨床意義
AZFa 區(qū)有效缺失導(dǎo)致唯支持細(xì)胞綜合征( Sertoli cell only syndrome,SCOS) ; AZFb 區(qū)以及 AZFbc 區(qū)有效缺失會導(dǎo)致 SCOS 或者精子成 熟阻滯( maturation arrest,MA) [10]。以上兩類患者通過手術(shù)獲得精子的概率幾乎為零[10]。AZFa、 AZFb 區(qū)部分缺失類型可保留基因全部或部分編碼 區(qū),有可能正常產(chǎn)生精子[11]。AZFc 區(qū)缺失患者臨床表現(xiàn)異質(zhì)性高,50% 的 NOA 患者可通過睪丸手術(shù) 取精獲得精子。AZFc 區(qū)缺失將遺傳至男性后代,缺 失區(qū)域可進(jìn)一步擴(kuò)大。AZFc 缺失患者的精子數(shù)目有進(jìn)行性下降的趨勢,應(yīng)及早生育或冷凍保存精子。
1. 1. 3 檢測方法
對于精子濃度少于 5 × 106 /ml 的患者,推薦進(jìn)行 Y 染色體微缺失檢測。Y 染色體微缺失檢測推薦以下 6 個基礎(chǔ)位點檢測: sY84 及 sY86 對應(yīng) AZFa 區(qū),sY127 及 sY134 對應(yīng) AZFb 區(qū), sY254 及 sY255 對應(yīng) AZFc 區(qū)。為了區(qū)分部分缺失 和有效缺失,建議在 6 個基礎(chǔ)位點檢測基礎(chǔ)上,進(jìn)行拓展位點檢測[10]。Y 染色體微缺失檢測方法包括但不局限于實時熒光定量 PCR 法( qPCR) 、毛細(xì)管 電泳法( CE) 、NGS 等。 Y 染色體 AZF 區(qū)域缺失推薦檢測位點主要根據(jù)歐美人群建立,是否有效適用于中國人群尚無定 論。鼓勵有條件的醫(yī)療機(jī)構(gòu)通過高通量檢測技術(shù) ( 如 NGS) 進(jìn)行深入研究。
1. 2 單基因致病變異
1. 2. 1 概述
NOA 和重度少精子癥的致病基因主要與精子發(fā)生相關(guān)。睪丸病理學(xué)表型可從 MA 至 SCOS。
1. 2. 2 致病基因
致病基因涉及精子發(fā)生的多個生物學(xué)過程,包括且不局限于精原細(xì)胞增殖及分化 ( 例如 NANOS1、SOHLH1) ,聯(lián)會復(fù)合體形成( 例如 SYCE1、SYCP2、SYCP3、TEX11、MEIOB) ,同 源 重 組 修 復(fù) ( 例 如 TEX15、FANCM ) ,細(xì) 胞 間 橋 形 成 ( TEX14) 等,以上基因變異均可造成精子發(fā)生障礙。 其中,TEX11 變異可解釋約 2% 的 NOA 病因[12],其 他基因所占比例尚不明確。
1. 2. 3 檢測意義和方法
上述基因變異導(dǎo)致的 NOA 患者,臨床上通過手術(shù)獲得精子的成功率較 低[13]。但臨床病例積累尚不足,鼓勵有條件的醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行相關(guān)研究,進(jìn)一步積累變異和病理對應(yīng)關(guān) 系。推薦對 NOA 患者在手術(shù)取精前,使用 NGS 對 無精子癥相關(guān)致病基因進(jìn)行檢測。
2 梗阻性無精子癥
2. 1 先天性輸精管缺如
2. 1. 1 概述
先天性輸精管缺如( congenital absence of the vas deferens,CAVD) 是梗阻性無精子癥 的重 要 病 因 之 一,占 不 育 男 性 的 1% ~ 2%[14]。 CAVD 分為先天性單側(cè)輸精管缺如( congenital unilateral absence of the vas deferens,CUAVD) 和先天性雙側(cè)輸精管缺如( congenital bilateral absence of the vas deferens,CBAVD) 。CBAVD 和部分 CUAVD 被認(rèn)為是囊性纖維化的輕度臨床表現(xiàn)[15]。目前認(rèn)為 CUAVD 伴腎臟發(fā)育不良或缺如和囊性纖維化無關(guān)[14]。
2. 1. 2 致病基因
CFTR 是囊性纖維化的致病基 因。多項中國患者人群研究表明,CFTR 變異可解 釋 68% ~ 80% 的 CBAVD,以 及 約 46% ~ 67% 的 CUAVD,這部分患者的 CAVD 被認(rèn)為是囊性纖維 化的輕度表現(xiàn)[16-19]。除 CFTR 外,ADGRG2 基因可 解釋約 2% 的 CBAVD 病因[14],另外 18% ~ 30% 左 右致病因素仍然未知。
2. 1. 3 檢測意義和方法
CBAVD 患者和不存在腎 臟異常的 CUAVD 患者應(yīng)篩查 CFTR 基因[20],如存 在變異,應(yīng)繼續(xù)篩查配偶 CFTR 基因,以判斷后代患 囊性纖維化風(fēng)險。由于中國 CAVD 患者人群不存 在高頻率熱點變異( 如 F508del) [17,21-24],推薦直接 篩查 CFTR 基因全部編碼區(qū)和 IVS9-5T [25]。另外, 推薦同時篩查 ADGRG2 基因,如存在變異,患者男性后代無遺傳風(fēng)險,女性后代為變異攜帶者。
2. 2 常染色體顯性多囊腎病
2. 2. 1 概述
常染色體顯性遺傳性多囊腎病( autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD) 的男性患者可出現(xiàn)精囊腺、附睪、前列腺部位等生殖 道囊腫,引起嚴(yán)重少弱精子癥、死精子癥,甚至梗阻性無精子癥,進(jìn)而導(dǎo)致不育[26]。
2. 2. 2 致病基因
PKD1,PKD2 和 GANAB 基因變 異可引起 ADPKD[27],分別占比 80% ~ 85% ,15% ~ 20% 和 0. 3% 左右。
2. 2. 3 檢測意義和方法
PKD1 基因存在 6 個具有極高序列相似性的假基因,需要優(yōu)化 NGS 捕獲探針和 Sanger 測序驗證引物,以達(dá)到正確檢出目的。 由于 ADPKD 為常染色體顯性遺傳性模式,遺傳概率為 50% ,建議遺傳咨詢,在生育時建議采取產(chǎn)前診斷或胚胎植入前基因檢測( preimplantation genetic testing,PGT) ,避免疾病遺傳給后代。
3 畸形精子癥
畸形精子癥( teratozoospermia) 指精子正常形態(tài)所占百分比低于 4%[28]。畸形精子癥的表型具有明顯的異質(zhì)性,不同患者的異常精子形態(tài)不盡相同。 特殊類型畸形精子癥是指精子形態(tài)表現(xiàn)為某種高度 一致性的畸形。現(xiàn)已明確的特殊類型畸形精子癥主要包括精子尾部多發(fā)形態(tài)異常( multiple morphological abnormalities of the sperm flagella,MMAF) 、大頭多尾 精子 癥 ( large-headed multiflagellar spermatozoa) 、圓 頭 精 子 癥 ( globozoospermia) 、無 頭 精 子 癥 ( acephalic spermatozoa syndrome) 。
3. 1 精子尾部畸形
3. 1. 1 概述
精子尾部畸形主要分為 MMAF 與原發(fā)性纖毛運動障礙( primary ciliary dyskinesia,PCD) 兩類。MMAF 主要表現(xiàn)為精子尾部形態(tài)異常,目前主要分為: 無尾、短尾、卷尾、折尾以及尾部不規(guī)則增 粗,其中短尾精子約占 50% 以上。由于精子尾部畸形影響精子運動能力,從而導(dǎo)致 MMAF 患者往往還 伴發(fā)嚴(yán)重的弱精子癥[29-30]。PCD 主要表現(xiàn)為呼吸道纖毛運動障礙導(dǎo)致的慢性呼吸系統(tǒng)炎癥( 支氣管 擴(kuò)張和鼻竇炎) ,如果合并胚胎節(jié)纖毛運動障礙導(dǎo)致的內(nèi)臟轉(zhuǎn)位則稱為 Kartagener 綜合征( Kartagener syndrome) [31]。PCD 患者與 MMAF 患者在精子鞭毛 形態(tài)異常表型相似,但 PCD 患者除了精子鞭毛形態(tài)異 常之外,常伴有呼吸道感染及肺部感染等癥狀[32]。
3. 1. 2 致病基因
Ben Khelif 等新穎提出 MMAF 概念并報道了第一個致病基因 DNAH1 [30]。截止目 前,共報道了超過 20 個致病基因,可以解釋大約 60% 的 MMAF 病例[30,33-44]。另外,已發(fā)現(xiàn)大約有 40 個 PCD 相關(guān)致病基因[45]。PCD 與 MMAF 致病基因有所重疊,例如 CCDC39 基因除了導(dǎo)致 PCD 之外, 同時也被證實與 MMAF 表型有關(guān)[46]。
3. 1. 3 檢測意義和方法
一般而言,遺傳原因?qū)е翸MAF 不建議藥物治療,使用 ICSI 可有效幫助患 者實現(xiàn)生育。因此需要通過 NGS 進(jìn)行 MMAF 相關(guān)基因檢測。另外,部分報道表明不同基因變異導(dǎo)致 的 MMAF 可能導(dǎo)致不同的 ICSI 結(jié)局,但目前研究樣 本有限,鼓勵有條件中心開展不同基因變異導(dǎo)致的 MMAF 與 ICSI 結(jié)局的關(guān)系[47]。
3. 2 精子頭部畸形
精子頭部畸形主要有大頭精 子、圓頭精子、無頭/大頭針狀精子、雙頭精子、梨形 頭精子及無定型頭精子,而通常單一畸形精子超過 85% 的患者,基因異常概率較大,混合畸形精子癥的 患者出現(xiàn)基因異常的可能性較小。目前的研究主要 針對大頭精子癥、圓頭精子癥和大頭針狀精子癥的 遺傳基因有了比較明確的認(rèn)識,而其他類型的頭部 畸形目前仍未找到明確的基因異常[48]。
3. 2. 1 大頭多尾精子癥
3. 2. 1. 1 概述
大頭多尾精子癥患者精液中精子 頭部形態(tài) 100% 異常,主要表現(xiàn)為精子形態(tài)異常( 大 頭,多頭,多尾,頂體異常) ,精子染色體 FISH 分析 提示精子染色體異常,從單倍體到四倍體不等。
3. 2. 1. 2 致病基因
AURKC 是目前唯一明確導(dǎo) 致大頭多尾精子癥的基因,致病變異可使中期染色 體錯配,導(dǎo)致減數(shù)分裂失敗和多倍體[49]。
3. 2. 1. 3 檢測意義和方法
通過基因檢測明確為 AURKC 基因變異的大頭多尾精子癥患者,由于精子染 色體大多呈非整倍體,輔助生殖技術(shù)治療預(yù)后較差[50]。
3. 2. 2 圓頭精子癥
3. 2. 2. 1 概述
圓頭精子癥主要特征表現(xiàn)為頂體 缺失,精子頭部形狀呈圓形。精子頭部頂體缺失使得精子無法附著并穿過卵子透明帶從而導(dǎo)致原發(fā)性 不育。
3. 2. 2. 2 致病基因
遺傳因素是導(dǎo)致圓頭精子癥 的主 要 原 因,現(xiàn)已報道的致病基因有 DPY19L2、 PICK1、SPATA16 等,其中 DPY19L2 基因變異或缺失 是最常見的遺傳因素[48]。
3. 2. 2. 3 檢測意義和方法
明確由于基因變異導(dǎo) 致的圓頭精子癥患者,其生育后代的唯一途徑為 ICSI,一般需結(jié)合卵母細(xì)胞激活完成受精,但其治療結(jié)局有時依然并不理想[48,51]。
3. 2. 3 無頭精子癥
3. 2. 3. 1 概述
無頭精子癥主要表現(xiàn)為精液中有大量活動的大頭針狀精子,少部分精子有頭部,但也與尾部呈不規(guī)則折角連接[52]。由于這些精子幾乎 頭尾有效分離,使其幾乎不可能完成自然生育[53]。
3. 2. 3. 2 致病基因
無頭精子癥一般為單基因隱 性遺 傳 模 式,目前已報道的基因包括 SUN5、PMFBP1、BRDT、TSGA10 等,其中 SUN5 和 PMFBP1 是導(dǎo)致無頭精子癥的最常見致病基因[54]。
3. 2. 3. 3 檢測意義和方法
無頭精子癥患者幾乎 無法完成自然生育,ICSI 是此類患者獲得后代有效 的方法[50,54]。但是,部分報道表明不同基因變異導(dǎo) 致的無頭精子癥,可能導(dǎo)致不同的 ICSI 結(jié)局,但研 究樣本數(shù)有限[55-56]。 此外,現(xiàn)已明確幾種特殊畸形精子癥的致病基 因均為常染色體隱性遺傳,沒有明顯熱點突變,并非 PGT 指征,但需告知患者遺傳風(fēng)險。
4 性發(fā)育異常
4. 1 概述
男性性發(fā)育異常( disorders of sexdevelopment,DSD) 患者主要以外生殖器男性化不足為特征,可有性腺發(fā)育異常,伴或不伴苗勒管結(jié)構(gòu)。根 據(jù)患者染色體情況,分為 46,XY DSD、46,XX DSD 及性染色體異常導(dǎo)致的 DSD。患者臨床表現(xiàn)復(fù)雜 多樣,例如 46,XY DSD 患者外生殖器可表現(xiàn)為有效 女性化到有效男性化[57]。 46,XY DSD 發(fā)病率約為1 /6 000,根據(jù)具體的發(fā) 病原因分為睪丸發(fā)育不良、雄激素合成障礙、雄激素 作用異常( 如有效和部分雄激素不敏感綜合征) ,其 他原因如苗勒管永存綜合征和單純性尿道下裂等。 46,XX DSD 根據(jù)具體病因分為卵巢發(fā)育異常,母親 或胎兒雄激素過量及其他原因( 如苗勒管發(fā)育不 良) 導(dǎo)致的性發(fā)育異常。性染色體異常主要是由于 47,XXY( Klineflter 綜合征及變異型) 、45,X/46,XY 或者 46,XX/46,XY 鑲嵌導(dǎo)致的性發(fā)育異常[58]。
4. 2 致病基因
DSD 遺傳背景復(fù)雜,包括多種基 因變異[59]。34% ~ 45% 的 DSD 患者可以明確致病 基因[60-63]。NR5A1 基因變異是 46,XY DSD 較為常 見的病因,約占10% ~ 20%[64]。尿道下裂作為性發(fā) 育異常的嚴(yán)重臨床表現(xiàn),約 50% 患 者 能 檢 出 SRD5A2 或 AR 變異[65]。
4. 3 檢測意義和方法
不同基因變異導(dǎo)致的性發(fā) 育異常的治療方式和預(yù)后差異較大,例如,SRD5A2 異??蓪?dǎo)致睪酮轉(zhuǎn)化雙氫睪酮障礙,可通過雄激素 替代、外用雙氫睪酮等方式治療。AR 異常則提示激 素替代治療預(yù)后差或無效。推薦使用 NGS 對非染 色體異常原因的性發(fā)育異?;颊哌M(jìn)行基因檢測以明 確病因[58]。
5 特發(fā)性低促性腺激素性性腺功能減退癥
5. 1 概述
特發(fā)性低促性腺激素性性腺功能減退 癥( idiopathic hypogonadotropic hypogonadism,IHH)是由于下丘腦促性腺激素釋放激素( GnRH) 合成、 分泌或作用障礙,導(dǎo)致垂體分泌促性腺激素減少,進(jìn) 而引起性腺功能不足的疾病。臨床根據(jù)患者是否合 并嗅覺障礙,將 IHH 分為兩類: 伴有嗅覺受損者的 Kallmann 綜合征( Kallmann syndrome) 和嗅覺正常的 IHH( normosmic IHH,nIHH) [66]。
5. 2 致病基因
目前已發(fā)現(xiàn)超過 30 個基因可導(dǎo)致 IHH,可解釋約 50% 的病例,其中 2. 5% 的患者可發(fā) 現(xiàn) 2 個或 2 個以上的基因變異,即存在寡基因致病 模式[67]。IHH 可伴發(fā)其他身體異常,如聯(lián)帶運動 ( ANOS1) 、牙發(fā)育不全( FGF8 /FGFR1) 或聽力損失 ( CHD7) 等[68],應(yīng)在臨床檢查中加以關(guān)注,以降低漏 檢率。中國人群 IHH 患者中常見的基因異常 有 PROKR2、CHD7、FGFR1、ANOS1 等[69],推薦優(yōu)先進(jìn) 行篩查。IHH 新致病基因仍然在不斷發(fā)現(xiàn),用于臨 床診斷時應(yīng)該評估臨床證據(jù)是否充分。
5. 3 檢測意義和方法
IHH 致病基因遺傳模式各有不同,例如 ANOS1 基因為 X 染色體隱性遺傳,而 FGFR1 和 PROKR2 為常染色體顯性遺傳。需注意 的是,部分常染色體顯性遺傳的 IHH 基因存在外顯 率不全,即使變異遺傳給后代,也可能不發(fā)病或癥狀 較輕微,在遺傳咨詢時需加以說明。基因檢測結(jié)果可能用于 提 示 IHH 治 療,例 如 GnRH 受 體 基 因 GNRHR發(fā)生變異,可能預(yù)示 GnRH 脈沖治療預(yù)后 差; PROKR2 變異患者可能 hCG 治療預(yù)后差[16],但 上述證據(jù)尚不充分,鼓勵有條件的醫(yī)療中心進(jìn)行相關(guān)研究。推薦使用 NGS 對 IHH 致病基因進(jìn)行檢測。
6 基因檢測結(jié)果對臨床管理的影響
基因檢測可明確不育癥具體病因,以此判斷藥 物治療效果、顯微取精或輔助生殖技術(shù)治療預(yù)后,并 預(yù)測后代遺傳風(fēng)險。然而,多數(shù)基因變異發(fā)生率低, 且有很多變異致病性尚不明確,需不斷積累相關(guān)基 因診斷和臨床數(shù)據(jù),以進(jìn)一步提高基因檢測臨床使 用價值。
6. 1 減少嘗試性治療
對于原因不明或者特發(fā)性男性不育癥,患者可能經(jīng)歷多次無效的試驗性治療。 基因檢測可幫助一部分患者明確病因,從而選擇合適的治療方案。具體有以下幾個方面: ①減少不必 要的藥物治療。例如,DNAH1 基因變異可導(dǎo)致精子 尾部畸形率高,藥物治療無效,可建議 ICSI,并有文 獻(xiàn)證明妊娠結(jié)局良好[70]; ②判斷顯微取精手術(shù)預(yù) 后。AZFa 或 AZFb 區(qū)有效缺失的 NOA 患者,通過 顯微取精手術(shù)幾乎不可能獲得精子[10]; TEX11 基因 變異可導(dǎo)致減數(shù)分裂停滯而引起 NOA[12],通過顯微取精手術(shù)獲得成熟精子概率較低; ③輔助生殖技 術(shù)治療預(yù)后。由 AURKC 基因變異導(dǎo)致的大頭多鞭 毛精子,其基因組為多倍體,ICSI 妊娠結(jié)局差; 部分 MMAF 相關(guān)基因如 DNAH17、CFAP65 等發(fā)生變異可 能導(dǎo)致 ICSI 預(yù)后不良[47],但由于研究病例數(shù)較少, 證據(jù)尚不充分。
6. 2 遺傳咨詢
部分由于遺傳異常導(dǎo)致的男性不 育患者可通過促性腺激素或促性腺激素釋放激素補 充治療或替代治療、顯微取精手術(shù)等方式成功生育 生物學(xué)后代,該類患者需重視遺傳咨詢,防止子代出現(xiàn) 相同癥狀。在明確基因診斷結(jié)果和臨床意義后,對于 符合指征的患者可建議產(chǎn)前診斷或 PGT。
7 基因檢測方法對結(jié)果正確性的影響
基因檢測技術(shù)發(fā)展至今,已有多種方法,它們因 其自身優(yōu)勢和劣勢,一般存在最佳適用場景。目前 在臨床基因檢測中比較常見的技術(shù)主要包括 Sanger 測序、實時定量 PCR、NGS 等。Sanger 測序和實時定 量 PCR 的適用范圍相似,主要應(yīng)用于單堿基位點變 異或者小片段插入缺失的檢測,其優(yōu)勢在于正確性 高、檢測速度快,但缺點是檢測通量較低。NGS 的 出現(xiàn)彌補了此缺點,極大降低了對多個基因區(qū)域同 時進(jìn)行測序的時間和費用,數(shù)據(jù)正確性高,已被臨床 廣泛用于遺傳病診斷,同時更快推動了疾病的研究 進(jìn)展。見表 1。
Table 1. Comparison of common genetic testing technologies
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Sanger測序 | 實時定量 PCR 技術(shù) | NGS | |
適用范圍 | 適用于少量位點的檢測,可檢測已知與未知變異 | 適用于少量位點的檢測,只能檢測已知變異 | 適用于全基因組檢測,可檢測已知與未知變異 |
檢測通量 | 每個反應(yīng)只能檢測一條序列 | 受限于可用熒光通道數(shù),只能檢測少數(shù)位點變異 | 高通量檢測 |
正確性 | 正確性高 | 正確性高 | 正確性較高 |
檢測費用 | 少量位點檢測成本較低,但如在單個樣本內(nèi)檢測位點較多時,成本極高 | 采用熒光顯色法,單位點成本高 | 總體費用較高,但單位點檢測成本低 |
臨床應(yīng)用 | 較多用于 NGS 結(jié)果的驗證 | 主要用于單個基因或少數(shù)位點的基因檢測 | 主要應(yīng)用于單基因遺傳病的診斷 |
由于男性不育遺傳病因?qū)W極為復(fù)雜,涉及基因 較多,且變異大多未經(jīng)報道,建議使用 NGS 同時對多個相關(guān)基因進(jìn)行檢測,推薦使用 NGS panel 對本 共識推薦的致病基因進(jìn)行變異檢測[69,71-72]。相對 于 全 外 顯 子 組 測 序 ( whole exome sequencing, WES) ,NGS panel 具有以下優(yōu)點: ①僅檢測具有明 確臨床證據(jù)的基因,避免誤診; ②NGS panel 可通過 增加探針覆蓋,檢測有明確臨床意義的非外顯子區(qū) 域,這些區(qū)域在 WES 檢測中會被遺漏; ③檢測成本 低于 WES 的前提下,NGS panel 可獲得更高測序深 度和均一性,從而高效檢出敏感性和特異性,有利于 提示鑲嵌變異。
需要注意的是,當(dāng)檢測目標(biāo)基因區(qū)域存在特殊 性,可能導(dǎo)致檢測結(jié)果錯誤或漏檢: ①同源假基因的 影響。男性生殖相關(guān)基因中,相當(dāng)一部分存在同源 假基因,如 ADPKD 致病基因 PKD1,IHH 致病基因 ANOS1,與性發(fā)育異常相關(guān)的先天性腎上腺皮質(zhì)增 生致病基因 CYP21A2,其假基因同源性大于 90% , 部分外顯子區(qū)域同源性大于 98% 。同源性高的區(qū) 域會嚴(yán)重影響基因檢測結(jié)果,因此應(yīng)該對該類基因在實驗方法或生物信息學(xué)算法上進(jìn)行優(yōu)化以區(qū)分真 假基因,找到真正的致病位點。推薦在文庫構(gòu)建過 程中,通過加入抑制探針,抑制假基因的擴(kuò)增,從而 對真基因/功能基因進(jìn)行富集,提高基因檢測對真假 基因的識別能力。②拷貝數(shù)變異影響??截悢?shù)變異 特別 是 雜 合 型、鑲嵌型拷貝數(shù)缺 失,需 優(yōu) 化 NGS panel 探針設(shè)計或補充其他檢測方法,以避免假陽性 或漏檢; 當(dāng)存在某些復(fù)雜類型的結(jié)構(gòu)變異時,需優(yōu)化 生物信息學(xué)算法,以避免遺漏真實存在的變異導(dǎo)致 假陰性。
此外,鑒于男性生殖相關(guān)基因的高度遺傳異質(zhì) 性,鼓勵有條件的醫(yī)療機(jī)構(gòu)在中華醫(yī)學(xué)會男科學(xué)分 會統(tǒng)籌協(xié)調(diào)下,協(xié)作建立中國人群特有男性生殖相 關(guān)基因數(shù)據(jù)庫和與之對應(yīng)的表型數(shù)據(jù)庫,以便為后續(xù) 的臨床基因診斷和遺傳咨詢提供堅實的數(shù)據(jù)支撐。
總之,遺傳學(xué)檢查對于指導(dǎo)男性生殖相關(guān)疾病 診療有重要意義,基因檢測指征及處理策略需要在 臨床中不斷完善。隨著檢測技術(shù)飛速發(fā)展及更多臨 床研究的開展,基因檢測在男性生殖相關(guān)疾病診斷 中的應(yīng)用也將更為深入與規(guī)范。
男性生殖相關(guān)基因檢測專家共識編寫組
顧 問:
谷翊群( 國家衛(wèi)生健康委科學(xué)技術(shù)研究所)
組 長: 商學(xué)軍( 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬金陵醫(yī)院)
副組長: 李 錚( 上海市第一人民醫(yī)院)
孫 斐( 南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院)
編 委: ( 排名不分先后)
<div font-size:14px;line-height:26px;text-indent:26px;"=""> 楊曉玉( 江蘇省人民醫(yī)院)史軼超( 常州市第二人民醫(yī)院)
顏宏利( 海軍軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院)
盧慕峻( 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院)
張峰彬( 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院)
金曉東( 浙江醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院)
傅 強(qiáng)( 山東省立醫(yī)院)
張志超( 北京大學(xué)第一醫(yī)院)
彭 靖( 北京大學(xué)第一醫(yī)院)
杜 強(qiáng)( 中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院)
高 勇( 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院)
劉貴華( 中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院)
王 瑞( 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院)
王 濤( 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院)
劉 剛( 中信湘雅生殖與遺傳??漆t(yī)院)
周 興( 湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院)
李和程( 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院)
蔣小輝( 四川大學(xué)華西第二醫(yī)院)
安 淼( 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院)
執(zhí) 筆:
劉貴華( 中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院)
安 淼( 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院)
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