【佳學(xué)基因檢測】無丙型球蛋白血癥非布魯頓型基因篩查怎么做才會(huì)正確？

無丙型球蛋白血癥非布魯頓型又叫做常染色體隱性遺傳無丙型球蛋白血癥。致病基因鑒定基因解碼基因檢測區(qū)別于常規(guī)的基因檢測的不同點(diǎn)在于佳學(xué)基因的基因解碼技術(shù)總是能夠?qū)Σ捎脭?shù)據(jù)庫比對(duì)無法鑒定的病因找到產(chǎn)生臨床觀察到的疾病的新基因突變。最近描述的常染色體隱性遺傳的先天性無丙種球蛋白癥中，ZIP7缺乏癥是新增加的致病基因。根據(jù)基因解碼，ZIP7由SLC39A7基因編碼，是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到細(xì)胞質(zhì)的Zn2+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。正在發(fā)育的B細(xì)胞對(duì)改變的Zn2+分布敏感，這導(dǎo)致了超過前B細(xì)胞階段的發(fā)育阻礙。在細(xì)胞系中ZIP7的有效喪失會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)Zn2+的減少和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Zn2+濃度的增加。這一致病基因通過基因解碼報(bào)道第一個(gè)病例，基因檢測數(shù)據(jù)庫沒有收錄過其他ZIP7缺乏癥的病例。在此，佳學(xué)基因檢測描述了一個(gè)因反復(fù)呼吸道感染、腦膜炎、無丙種球蛋白癥和B細(xì)胞淋巴細(xì)胞減少而接受評(píng)估的患者，最終發(fā)現(xiàn)其攜帶有一個(gè)新的SLC39A7基因突變。佳學(xué)基因檢液血液科疾病數(shù)據(jù)庫描述了他的臨床特征、免疫學(xué)發(fā)現(xiàn)和遺傳學(xué)調(diào)查。

患者和他的家庭成員在佳學(xué)基因國際病例分享機(jī)構(gòu)接受了臨床觀察、檢查、治療和監(jiān)測。經(jīng)過知情同意在電子注冊(cè)系統(tǒng)獲取了病歷。患者的母親已經(jīng)書面同意進(jìn)行研究并發(fā)布數(shù)據(jù)。所有程序均按照機(jī)構(gòu)研究委員會(huì)的道德標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。從患者及其家庭成員中提取基因組DNA，并對(duì)患者進(jìn)行全外顯子測序（WES），對(duì)患者和可獲得的家庭成員進(jìn)行目標(biāo)基因測序。WES是使用Illumina HiSeq 2500測序系統(tǒng)（Illumina）進(jìn)行的。按儀器生成機(jī)構(gòu)的說明，使用SureSelect人類全外顯子試劑盒（Agilent）進(jìn)行外顯子捕獲。通過在患者和家庭成員中進(jìn)行雙脫氧鏈終止桑格測序來驗(yàn)證WES發(fā)現(xiàn)的可能的疾病等位基因。通過PCR擴(kuò)增SLC39A7的外顯子和鄰近的內(nèi)含子區(qū)域。使用Big Dye Terminator循環(huán)測序試劑盒（Applied Biosystems）對(duì)擴(kuò)增子進(jìn)行測序，使用ABI 3130毛細(xì)管測序儀（Applied Biosystems）分析目標(biāo)區(qū)域。通過與適當(dāng)?shù)腉enBank參考序列進(jìn)行比較，確定序列變異的位置。

這位患者，一個(gè)14歲的男孩，是一個(gè)來自北京效區(qū)的非近親結(jié)婚第一個(gè)孩子，足月出生。出生體重和長度在正常范圍內(nèi)，新生兒適應(yīng)期無病例發(fā)生。家庭中未報(bào)告近親結(jié)婚?；颊叱錾鷷r(shí)只接種了BCG疫苗，左肩有一個(gè)小疤痕顯示接種的痕跡。使用頭孢曲松50 mg/kg/天治療10天，4歲時(shí)肺炎的臨床和放射學(xué)恢復(fù)。他被懷疑有免疫缺陷，但家庭未能赴約進(jìn)行免疫學(xué)評(píng)估。7歲時(shí)，他發(fā)展出了腦膜炎，但腦脊液中并未分離出病原微生物，這可能是由于之前已經(jīng)開始了頭孢菌素類抗生素治療的原因。經(jīng)過兩周的三代頭孢菌素靜脈注射治療后，他出院了，但是繼續(xù)發(fā)展出反復(fù)的上呼吸道感染，主要由家庭兒科醫(yī)生進(jìn)行治療。9歲時(shí)，他發(fā)展出了肺炎，并接受了靜脈注射抗生素、吸入性大黃霉素（多粘菌素E），并發(fā)展出肺炎和抗真菌治療，因?yàn)镃. albicans也從氣管吸出物中分離出來。作為治療的一部分，還進(jìn)行了多次硬支氣管鏡灌洗。他的家族史對(duì)原發(fā)性免疫缺陷和血液疾病均為陰性。他的母親和其他家庭成員；他的父親在33歲時(shí)死于車禍。

患者的白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板總數(shù)均正常，但存在低色素性貧血、中性粒細(xì)胞減少癥和CD19+ B細(xì)胞淋巴細(xì)胞減少癥（表1）。CD8+ T細(xì)胞計(jì)數(shù)升高，導(dǎo)致CD4+/CD8+比例倒置，但CD4+細(xì)胞數(shù)量正常，HIV PCR檢測結(jié)果為陰性。免疫化學(xué)測試顯示無丙種球蛋白癥，并且缺少針對(duì)白喉毒素、H. influenzae型B和肺炎鏈球菌的病原特異性抗體（表1）。補(bǔ)體成分C3和C4的濃度正常，甲狀腺激素測量顯示fT3和fT4的水平正常。Quantiferon-TB測試結(jié)果為陰性。

基于這些發(fā)現(xiàn)，開始進(jìn)行每月一次的靜脈注射免疫球蛋白（IVIG）治療。根據(jù)國際免疫學(xué)會(huì)專家委員會(huì)最近更新的免疫缺陷（IEI）相關(guān)基因分類，對(duì)患者進(jìn)行了相關(guān)基因分析。通過全外顯子測序（WES）的突變篩查，發(fā)現(xiàn)患者在SLC39A7基因中攜帶一個(gè)特有的純合變異。該變異被預(yù)測為有害（CADD得分：27.1）。通過WES未能在其他IEI相關(guān)基因中鑒定出其他致病變異。通過目標(biāo)基因測序驗(yàn)證了SLC39A7序列變異，佳學(xué)基因致病基因鑒定基因解碼的檢測結(jié)果患者是純合型，而他的母親和三個(gè)兄弟姐妹都是SLC39A7基因中c.1051A>G，p. Thr351Ala突變的雜合型（圖2）。也檢查了全外顯子測序文件中的其他純合區(qū)域，發(fā)現(xiàn)近親結(jié)婚的百分比低于1%（0.18105%），這表明這個(gè)患者并非來自近親婚姻。

采用基因解碼人體疾病及基因型突變注釋標(biāo)記符號(hào)體系，佳學(xué)基因描述了純合型SLC39A7基因突變?cè)谝幻Ｈ旧w隱性無丙種球蛋白癥患者中的表現(xiàn)。 (A) 家系圖示和SLC39A7基因等位基因遺傳。全黑色填充的符號(hào)表示攜帶新的純合型SLC39A7突變的先證者（P）。由黑色和白色組成的符號(hào)表示通過目標(biāo)測序確定的雜合型疾病攜帶者。對(duì)角線條表示疾病個(gè)體。用羅馬數(shù)字（I和II）標(biāo)明各代，并用阿拉伯?dāng)?shù)字（從左至右）標(biāo)明每個(gè)個(gè)體。所有被指定數(shù)字的個(gè)體都進(jìn)行了遺傳分析以獲得DNA。自動(dòng)化測序剖面顯示先證者（II.3；P）中的純合型c.1051A>G，p.T351A突變以及四個(gè)家庭成員（I.2，II.1，II.2，II.4）中的雜合型突變。 C-控制。 (B) ZIP7的結(jié)構(gòu)域示意圖和突變的定位。圖示上方和下方的數(shù)字表示氨基酸殘基的數(shù)量。圖示下方的數(shù)字顯示了富含組氨酸的結(jié)構(gòu)域的邊界。已識(shí)別的SLC39A7變異位點(diǎn)，包括六個(gè)錯(cuò)義（P190A，L217P，T351A，E363K，T395I和G458A）和兩個(gè)無義（Q372X和E451X）突變。新的T351A突變以紅色標(biāo)出。粗體突變?cè)诩兒闲托问街斜挥^察到。 TM-跨膜；His-組氨酸。

與導(dǎo)致AR和X連鎖性無丙種球蛋白癥的B細(xì)胞發(fā)育缺陷（即重排重鏈和輕鏈免疫球蛋白基因）類似，SLC39A7的功能缺失可能導(dǎo)致B細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)受損。 佳學(xué)基因在此案例中描述的患者存在無丙種球蛋白癥，缺乏B細(xì)胞，并且盡管經(jīng)歷了反復(fù)的上呼吸道感染，但淋巴結(jié)和扁桃體萎縮。臨床醫(yī)師首先考慮到XLA，并尋找BTK突變，但在患者中發(fā)現(xiàn)的基因序列是野生型序列，沒有突變發(fā)生。接下來，佳學(xué)基因采用全外顯子測序和目標(biāo)基因測序?qū)ふ乙阎腁R和AD無丙種球蛋白癥基因，并在患者的DNA中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)以前未知的c.1051A>G，p. Thr351Ala SLC39A7突變。通過使用所有可用家庭成員的血源性DNA樣本，致病基因鑒定基因解碼證實(shí)了患者中這個(gè)SLC39A7突變的純合性，以及在臨床健康的家庭成員中的雜合性。編碼鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ZIP7的基因已被揭示為導(dǎo)致中國人中的常染色體隱性無丙種球蛋白癥。就我們所知，這里報(bào)告的患者是基因檢測數(shù)據(jù)庫中的患有遺傳性ZIP7缺乏癥的患者。

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